透明質酸促進巨噬細胞吞噬的作用機制研究.pdf

1、目的：研究透明質酸(hyaluronan，HA)對巨噬細胞吞噬功能的影響，探討CD44介導HA作用的機制。 方法：從SD大鼠腹膜腔分離巨噬細胞，用RPMI1640培養(yǎng)。用免疫熒光染色法標記巨噬細胞的CD44，在熒光顯微鏡下觀察CD44在巨噬細胞的分布。在噬動軌跡實驗，將巨噬細胞接種在預涂不同細胞外基質和鋪有氯化金顆粒的蓋玻片上。細胞吞噬顆粒后，用圖像分析儀測量細胞周圍的無顆粒軌跡面積，并在掃描電鏡下觀察細胞的形態(tài)。用CD44阻斷

2、抗體處理細胞后，觀察細胞吞噬氯化金顆粒的變化。在吞噬熒光微珠實驗，熒光顯微鏡下計數(shù)巨噬細胞吞噬的熒光微珠數(shù)。阻斷細胞表面的CD44后，觀察細胞吞噬熒光微珠的變化。用4％多聚甲醛固定細胞后，再用phallacidin標記吞噬微珠細胞的F-肌動蛋白，共聚焦激光掃描顯微鏡下觀察吞噬熒光微珠處細胞內F-肌動蛋白的分布。在吞噬HA包被微珠實驗，利用氨基與羧基之間的縮合反應使HA結合于氨基化修飾的微珠表面。用SABC-FITC標記微珠表面的HA。計