Eprin B2在靜脈高壓誘導(dǎo)的硬腦膜動靜脈瘺形成中作用的初步研究.pdf

1、研究背景:硬腦膜動靜脈瘺(DAVF)是硬腦膜及其附屬結(jié)構(gòu)上動脈和靜脈之間異常的直接開放，占顱內(nèi)血管畸形的10％-15％。硬腦膜動靜脈瘺的發(fā)病機(jī)制目前不明，目前學(xué)說眾多。目前靜脈高壓被公認(rèn)為DAVF形成的關(guān)鍵因素。靜脈高壓可導(dǎo)致局部組織低灌注，誘導(dǎo)組織釋放缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)，并上調(diào)VEGF，促進(jìn)血管新生，誘發(fā)DAVF。但前期研究發(fā)現(xiàn)，單純提高VEGF表達(dá)，并不能提高DAVF誘導(dǎo)率，提示DAVF形成過程中還需其他分子參與。血管的形

2、成需要經(jīng)歷新生和成熟兩個過程認(rèn)為，DAVF中的異常血管形成也需要經(jīng)歷上述兩個過程。Ephrin B2在血管早期重塑過程中作用關(guān)鍵。此外，有報(bào)道在硬腦膜動靜脈瘺的病理標(biāo)本中，Ephrin B2表達(dá)升高。提示Ephrin B2可能在硬腦膜動靜脈瘺形成過程中扮演重要角色。據(jù)此，提出假設(shè):Ephrin B2在DAVF形成過程中的血管重塑方面發(fā)揮了重要作用。
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　1.構(gòu)建能夠誘導(dǎo)DAVF的靜脈高壓大鼠改進(jìn)模型。

3、　　2.檢測Ephrin B2及其上游信號元件HIF-1α在靜脈高壓大鼠模型硬腦膜組織中時間、空間上的分布。探索Ephrin B2在硬腦膜動靜脈瘺形成過程中的可能作用。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　第一部分:將60只SD大鼠隨機(jī)分為三組，其中A組20只行右側(cè)頸總動脈頸外靜脈吻合，同時結(jié)扎上矢狀竇以及左側(cè)面靜脈出口;B組20只行結(jié)扎上矢狀竇及左側(cè)面淺靜脈出口;C組20只大鼠為假手術(shù)組。術(shù)后1、7分別取各組5只大鼠行左側(cè)引流靜脈壓力(D

4、VP)測定;12周后，所有存活大鼠腹主動脈插管行腦血管造影觀察硬腦膜動靜脈瘺DAVF的形成。
　　第二部分:將120只SD大鼠隨機(jī)分為三組，其中A組40只行右側(cè)頸總動脈頸靜脈吻合，同時結(jié)扎上矢狀竇以及左側(cè)面靜脈出口;B組40只行結(jié)扎上矢狀竇及左側(cè)面淺靜脈出口;C組40只大鼠為假手術(shù)組。分別于在術(shù)后第1、3、7、14天處死三組各10只大鼠，其中4只經(jīng)心臟行多聚甲醛灌注，取硬腦膜及腦組織。行免疫組化染色，檢測Ephrin B2在竇匯附

5、近大鼠腦組織及硬膜上的分布，6只行脊椎脫臼處死，取新鮮腦組織行RT-PCR檢測Ephrin B2和HIF-1αmRNA的表達(dá)量。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　第一部分:A組大鼠引流靜脈壓力平均值為20.8±2.2mmHg，明顯高于B組5.5±0.9mmHg和C組1.9±0.3mmHg。
　　第二部分:術(shù)后第1天，A組和B組硬膜組織免疫組化染色可見EphrinB2在內(nèi)皮細(xì)胞中高表達(dá)，并在第7天達(dá)到高峰，第14天開始下降，IOD值

6、在第7天A組明顯高于B組;C組未見明顯EprinB2高表達(dá)。qPCR結(jié)果，與家手術(shù)組相比，術(shù)后第一天，A組EprinB2 mRNA轉(zhuǎn)錄水平增高，并在第7天達(dá)到高峰，第14天開始下降，B組與A組類似;A組HIF-1α在第1天mRNA轉(zhuǎn)錄水平最高，并隨時間下降;A組和B組EprinB2 mRNA和HIF-1α的轉(zhuǎn)錄水平呈現(xiàn)一定的相關(guān)性。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:改進(jìn)后靜脈高壓模型可維持靜脈高壓較長時間，并成功誘導(dǎo)DAVF，誘導(dǎo)率為40％。Eph