兩種體外方法評價不同根管封閉劑對臨床分離糞腸球菌抗菌效果的研究.pdf

1、根管治療的目的在于徹底清除感染物質(zhì)與壞死組織，促進組織的修復(fù)與再生。然而以目前的根管預(yù)備和消毒方法，不能完全清除根管內(nèi)的微生物；加之根管解剖的變異和復(fù)雜性，感染根管的細菌常存在于牙本質(zhì)小管、根管側(cè)枝等較隱匿的區(qū)域。這些細菌繁殖后會造成根管內(nèi)的再感染，最終導(dǎo)致根管治療的失敗。因此，對于永久充填在根管內(nèi)的封閉劑來說，不僅需要有良好的封閉性能來封閉根管的冠方和根方，還需要具有抗菌活性來殺滅根管內(nèi)的殘余細菌，提高根管治療的成功率。
　　因

2、此，在根管充填中選用抗菌能力強的封閉劑，對于徹底預(yù)防再感染能起到關(guān)鍵的作用。隨著口腔材料學(xué)的發(fā)展，許多新型根管封閉劑不斷應(yīng)用于臨床，如GuttaFlow、iRoot SP封閉劑等，其良好的生物相容性、嚴密的封閉性和便捷的操作性，使其在臨床治療中的應(yīng)用日益廣泛，但是其抗菌性能如何？和傳統(tǒng)的封閉劑相比，其抗菌性能有何優(yōu)勢？值得我們分析研究。目前，研究封閉劑抗菌性的方法較多，如ADT、DCT、感染根管模型等，其具有各自優(yōu)缺點，不同方法得出的抗

3、菌效果是否一致？這也值得我們對比研究。
　　本課題通過選用DCT和感染根管模型兩種體外檢測方法，對氧化鋅丁香油（zinc oxide-euqenol，ZOE）、AH-Plus、GuttaFlow、iRoot SP和Vitapex五種臨床常用的根管封閉劑的抗菌效果進行研究分析，觀察其對臨床分離糞腸球菌（Enterococcus faecalis，E.f）的抗菌效果，并測定其流動性和pH值，以期為臨床治療的選擇提供依據(jù)，也為設(shè)計更加完

4、善的評價封閉劑抗菌性能的實驗提供思路。實驗分為以下四個部分：
　　一、臨床E.f的采集、分離和鑒定
　　選取就診于我科室的病例20例，均需要根管再治療。采用糞鏈球菌培養(yǎng)基（Streptococcus Faecalis Medium，SF Medium）和膽汁七葉苷培養(yǎng)基對臨床分離的菌株進行培養(yǎng)，通過觀察顏色變化進行初步鑒定；鑒定為陽性結(jié)果的菌株利用 BBL CRYSTAL系統(tǒng)進行細菌生化反應(yīng)的鑒定；最后利用聚合酶鏈反應(yīng)（po

5、lymerase chain reaction，PCR）和DNA純化回收技術(shù)，鑒定細菌的16SrRNA序列，并與基因庫中的標(biāo)準(zhǔn)菌進行比對。結(jié)果顯示，在收集的20例病例樣本中，有6例分離鑒定出E.f，檢出率為30％。本實驗說明16SrRNA和PCR擴增技術(shù)是目前臨床中檢測鑒定E.f的重要方法，其精確度明顯大于傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)法，確保了實驗的準(zhǔn)確性。
　　二、利用DCT評價不同根管封閉劑的抗菌效果
　　將ZOE、AH-Plus、

6、GuttaFlow、iRoot SP和Vitapex五種封閉劑均勻混合后放入離心管底部，陽性對照組選用凡士林。在新鮮混合（20min）和1d、3d、7d、14d時分別取出相應(yīng)樣本，與提前配制的 E.f菌懸液充分接觸1h，陰性對照組加入無菌去離子水。隨后吸取菌液梯度稀釋，厭氧培養(yǎng)并鋪板計數(shù)，記錄24h內(nèi)五種封閉劑抗菌效果的變化。結(jié)果顯示：生物陶瓷類封閉劑 iRoot SP和AH-Plus在新鮮混合時（20min）可以完全殺滅細菌，且iRo

7、ot SP的抗菌能力可以維持7d（P<0.05）；ZOE、AH-Plus和Vitapex封閉劑在新鮮混合時（20min）具有較強的抗菌性（P<0.05），但3d后抗菌性基本消失（P>0.05）；而GuttaFlow封閉劑則對臨床分離的E.f沒有抗菌效果（P>0.05）。
　　三、利用E.f感染根管模型評價不同根管封閉劑的抗菌效果
　　收集單直根管人牙成功建立 E.f感染根管模型，隨機分為五個實驗組（ZOE、AH-Plus、G

8、uttaFlow、iRoot SP和Vitapex）進行根管充填，并同時設(shè)置陽性、陰性對照組。分別在1d、3d、7d和14d時取出相應(yīng)樣本，利用球鉆磨除充填材料和牙本質(zhì)。收集粉末并進行梯度稀釋，培養(yǎng)后細菌計數(shù)。結(jié)果顯示：GuttaFlow封閉劑仍然對臨床分離的E.f沒有抗菌效果（P>0.05），而其余封閉劑的抗菌性均可以維持到14d（P<0.05），其抗菌時間較DCT實驗中有所延長；ZOE、AH-Plus和Vitapex三種封閉劑的抗菌

9、性在3d后基本上無變化（P>0.05），而 iRoot SP在14d時抗菌性最強（P<0.05），說明隨著時間的延長，其抗菌性并沒有減弱。據(jù)此得出初步結(jié)論：在評價封閉劑抗菌能力時，應(yīng)根據(jù)各封閉劑的組成成分、物理化學(xué)特性，選擇合適的方法進行測定。
　　四、體外不同根管封閉劑流動性和pH值的測定
　　五種封閉劑各自混合后放置在玻璃板中心位置，并將另一塊玻璃板輕壓于封閉劑表面，在其上放置120g砝碼。10分鐘后，取下覆蓋于封閉劑上

10、的玻璃板和砝碼，用游標(biāo)卡尺測量各封閉劑形成圓形圖案的最大與最小直徑，取其平均值。pH測定方法為：各封閉劑均勻涂抹在24孔板的孔底部，分別在混合后20min和1d、3d、7d、14d取出，將3ml去離子水加入到每個孔中，利用pH測試儀進行檢測。結(jié)果顯示：流動性由強到弱排序為iRoot SP>GuttaFlow>ZOE>AH-Plus>Vitapex；14d時pH由高到低的排列順序為iRoot SP>VItapex>AH-Plus>Gutt