G蛋白偶聯(lián)受體激酶6同源二聚化的機(jī)制及其對胞膜定位的影響.pdf

1、獨(dú)創(chuàng)聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含未獲得(洼；塑逡直墓絲盂要掛別直咽趁!丕欄亙窒2或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：汾嗣簽字日期：p心年／月歲日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解桂

2、林醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)桂林醫(yī)學(xué)院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同時授權(quán)中國學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》、《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。(保密的學(xué)位論文在

3、解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：溉司導(dǎo)師簽字：簽字日期：加∥年／月；日簽字日期G蛋白偶聯(lián)受體激酶6同源二聚化的機(jī)制及其對胞膜定位的影響中文摘要目的：G蛋白偶聯(lián)受體激酶(Gproteincoupledreceptorkinases，GRKs)通過特異性地磷酸化配體激活的G蛋白偶聯(lián)受體(Gproteincoupledreceptors，GPCRs)，快速“關(guān)閉”或“減敏(desensitization)”激動劑持續(xù)引發(fā)的信號傳導(dǎo)，從而

4、調(diào)控GPCR介導(dǎo)的各種生理病理活動。GRK6屬于GRK4亞家族成員，在調(diào)節(jié)細(xì)胞功能代謝以及神經(jīng)元退行性變中發(fā)揮重要作用。GIⅨ6晶體結(jié)構(gòu)顯示，在氨基端區(qū)的G蛋白信號調(diào)節(jié)子(RGS)結(jié)構(gòu)域中存在一個由Ile39、Metl65、Tyrl66和Phe5274個疏水性氨基酸組成的同源二聚化作：界面，人工突變這些氨基酸殘基導(dǎo)致叫6蛋白的激酶活性顯著降低。因此，二聚化可能是GRK6調(diào)控GPCR的重要機(jī)制之一。迄今為止，還未有GRK在細(xì)胞內(nèi)形成二聚體

5、的報道。另一方面，定位細(xì)胞膜是GRK調(diào)控GPCR信號通路的前提條件，而GIⅨ6分子同源二聚化對其胞膜定位的影響目前還不清楚。本研究旨在揭示GIⅨ6在細(xì)胞內(nèi)同源二聚化的現(xiàn)象與機(jī)制、及其對GIⅨ6胞膜定位的影響。方法：首先，本實(shí)驗(yàn)采用競爭性雙分子熒光互補(bǔ)(BiFCC)方法，在共轉(zhuǎn)染融合質(zhì)粒pBiFCGRK6VNl73／pBiFCGRK6VC155基礎(chǔ)上加入GRK6mChen了及pmCheqN1至玎三K293細(xì)胞中，檢測BiFC熒光信號改變。