創(chuàng)傷性腦損傷后炎性因子TNF-α和IL-6表達(dá)的實驗研究.pdf

1、目的：探討腫瘤壞死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)在大鼠急性創(chuàng)傷性腦損傷后的表達(dá)及其變化規(guī)律，以及抑制其表達(dá)是否達(dá)到減輕繼發(fā)性腦損傷，力圖為臨床治療顱腦損傷技術(shù)的提高提供新的理論依據(jù)。 材料與方法：Sprague-Dawley大鼠56只，體質(zhì)量275g-342g。按隨機(jī)原則分為A、B、C、D、E、F、G7組，每組8只。用10％水合氯醛腹腔注射(3ml/kg體重)，麻醉生效后，將大鼠頂枕部鼠毛剪去。常規(guī)消毒后頂枕部中線切

2、開頭皮，長4cm，鈍性剝開軟組織、骨膜，暴露顱骨。在人字縫前3mm，顱骨中線旁3mm，鉆直徑5mm的圓形骨窗，保持硬膜完好無損。采用自由落體打擊裝置，以30g重錘從35cm高處打擊，造成重型腦損傷，記錄打擊時間，縫合頭皮飼養(yǎng)。G組動物只行開顱手術(shù)，不做腦挫傷作為對照。對A、B、C、D、E、F組實驗動物分別于手術(shù)后24h、72h、120h、1w、2w、3w時間點取標(biāo)本。深麻醉致死后，立即開胸自左心尖插管自升主動脈，以含4％多聚甲醛的0.1

3、MPB(PH7.4)灌注后快速剝?nèi)∧X組織，留取臨近挫傷灶后方(臨界區(qū))及對側(cè)相應(yīng)部位(未損區(qū))大腦為實驗標(biāo)本。對照組在相應(yīng)部位進(jìn)行取材作為正常對照。4％多聚甲醛固定24小時以上，制蠟塊，石蠟切片厚約5微米。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色SP法檢測TNF-α，IL-6蛋白質(zhì)在全部標(biāo)本中的表達(dá)。通過測定陽性反應(yīng)物的灰度，對免疫組織化學(xué)染色陽性反應(yīng)物進(jìn)行定量檢測。應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包，對免疫組織化學(xué)結(jié)果以x±s表示，用完全隨機(jī)設(shè)計的單因數(shù)方差

4、分析，SNK-q檢驗對結(jié)果進(jìn)行分析。檢驗標(biāo)準(zhǔn)采用p<0.05統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果：免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：TNF-α著色于胞漿中，各實驗組標(biāo)本中都有表達(dá)，對照組標(biāo)本中偶見表達(dá)，有統(tǒng)計學(xué)差別(P<0.01)。B、C組表達(dá)最明顯，且二者表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差別(P>0.05)。C組，損傷側(cè)(臨界區(qū))與對側(cè)相應(yīng)部位(未損區(qū))表達(dá)廣泛，無統(tǒng)計學(xué)差別(P>0.05)。A、D、E、F組，臨界區(qū)比未損區(qū)表達(dá)明顯，有統(tǒng)計學(xué)差別(P<0.05)。 I

5、L-6著色于胞漿中，各實驗組標(biāo)本中損傷側(cè)(臨界區(qū))都有表達(dá)，G組標(biāo)本中未見表達(dá)，有統(tǒng)計學(xué)差別(P<0.01)。D組表達(dá)最明顯。對側(cè)相應(yīng)部位(未損區(qū))D、E、F有較明顯表達(dá)。A、B、C組對側(cè)相應(yīng)部位(未損區(qū))有少量表達(dá)，無統(tǒng)計學(xué)差別(P>0.05)。 結(jié)論：1.TNF-α在創(chuàng)傷早期就有表達(dá)，第3，5天最高，且無統(tǒng)計學(xué)差別(P>0.05)，第2，3周仍明顯高于正常。故重型顱腦損傷后存在炎性因子TNF-α的過度表達(dá)。第3周高于第2周(

6、P<0.05)，考慮在重型顱腦損傷后的恢復(fù)期，TNF-α參與了腦損傷的修復(fù)過程。2.IL-6在創(chuàng)傷1周后表達(dá)最高，第2，3周也表達(dá)明顯，表達(dá)高峰晚于TNF-α表達(dá)高峰時間，TNF-α可能誘導(dǎo)了IL-6的表達(dá)。在創(chuàng)傷一周內(nèi)，腦組織雙側(cè)表達(dá)差異顯著，IL-6不存在廣泛過度表達(dá)，有可能主要參與了腦損傷后的修復(fù)。3.TNF-α表達(dá)高峰在3-5天，與臨床上腦水腫高峰期相符合，與腦脊液檢測結(jié)果相近，故腦脊液檢測TNF-α水平可作為間接反映顱內(nèi)炎癥指