肥胖和T2DM的FFA代謝紊亂及其ATH機制的研究.pdf

1、本文對肥胖和T2DM的FFA代謝紊亂及其ATH機制進行了研究。本研究分為兩個部分：
　　 第一部分：腹型肥胖和2型糖尿病患者血清游離脂肪酸譜的研究。
　　 目的：建立一種可以精細(xì)測定多種血清游離脂肪酸(FFA)成分的高效液相色譜法(HPLC)，探索2型糖尿病患者、腹型肥胖患者與健康人的血清FFA構(gòu)成特點，以期為HPLC今后應(yīng)用于FFA譜的臨床檢測和指導(dǎo)相關(guān)疾病患者的膳食結(jié)構(gòu)調(diào)整準(zhǔn)備條件。
　　 方法：建立測定血清

2、棕櫚油酸(POA)、花生四烯酸(AA)、亞油酸(LOA)、油酸(OA)、棕櫚酸(PA)、硬脂酸(SA)等六種FFA成分的HPLC方法，測定對照組(Control)60例、腹型肥胖組(AOB)145例、腹型肥胖前期組(Pre-AOB)68例、超重/肥胖且腹圍正常組(OW/OB-NWC)24例、肥胖的2型糖尿病組(OBDM)58例和不伴肥胖的2型糖尿病組(NOBDM)20例的血清FFAs譜，比較各組間FFAs和脂聯(lián)素的差別，分析其與人體測量

3、指標(biāo)、生化指標(biāo)、胰島素敏感性、胰島β細(xì)胞功能間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：成功建立了可精細(xì)測定血清FFAs譜的柱前衍生反相HPLC方法，經(jīng)方法學(xué)鑒定其精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性均較好。各組間血清FFAs譜存在顯著差異，與Control組相比，Pre-AOB、AOB組和2個糖尿病亞組飽和脂肪酸(SFA)濃度或構(gòu)成比升高(SA和PA)，單不飽和脂肪酸(MUFA)濃度或構(gòu)成比降低(POA)，多不飽和脂肪酸(PUFA)中AA升高。血清脂聯(lián)素水平，

4、Pre-AOB[1.53(1.34～1.88)μg/ml]、AOB組[1.50(1.22～2.15)μg/ml]和2個糖尿病亞組[1.41(1.24～1.60)，1.52(1.28～2.11)μg/ml]均較Control組[1.76(1.46～2.06)μg/ml]顯著降低，也與各組胰島素敏感性狀況符合。FFAs與人體測量指標(biāo)、生化指標(biāo)、胰島素敏感性、胰島β細(xì)胞功能指標(biāo)間存在一定的相關(guān)性。
　　 結(jié)論：腹型肥胖、2型糖尿病患者

5、存在著脂肪酸代謝的紊亂，并且腹型肥胖前期這種異常即已發(fā)生。SA等飽和脂肪酸對于胰島素敏感性、β細(xì)胞功能、血糖、血脂譜甚至血壓都是不利的，而POA等MUFA則具有一定的保護作用，PUFA中AA和LOA的作用不盡相同，AA具有較強的脂毒性，LOA則可能對血脂譜和尿酸、血糖等代謝方面有益。
　　 第二部分：缺氧對3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗、炎癥和脂肪酸代謝的影響。
　　 目的：從“脂肪組織缺氧(ATH)”這一全新視角切入，

6、通過體外研究的方法，觀察缺氧在胰島素敏感性/抵抗、慢性炎癥、脂代謝紊亂等方面對3T3-L1脂肪細(xì)胞的影響，并進一步通過分子生物學(xué)手段研究其可能的機制。
　　 方法：1％O2處理分化成熟的鼠3T3-L1脂肪細(xì)胞24小時，蛋白質(zhì)印跡法(WesternBlot)和實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(Real-Time RT-PCR)檢測缺氧反應(yīng)性基因——缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)、葡萄糖轉(zhuǎn)運子1(GLUT-1)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF

7、)的蛋白和mRNA水平以驗證缺氧效果。采用Western Blot檢測全細(xì)胞提取物IRS-1蛋白表達(dá)水平和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平以觀察低氧對胰島素信號通路的影響;酶免法(ELISA)和Real-Time RT-PCR分別測定細(xì)胞培養(yǎng)基上清和脂肪細(xì)胞中炎癥因子(TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1);脂肪細(xì)胞中脂肪因子（脂聯(lián)素、瘦素）的水平也進行了檢測。ELISA檢測培養(yǎng)基中甘油和游離脂肪酸(FFA)以評估低氧對于脂肪細(xì)

8、胞脂解的影響，Real-Time RT-PCR檢測低氧對過氧化物酶體增殖物活化受體(PPAR-γ)、CCAAT盒增強子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)、脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白1(FATP1)、CD36、脂肪酸結(jié)合蛋白4(FABP4)重要的脂代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：低氧組3T3-L1脂肪細(xì)胞HIF-1α、GLUT-1蛋白水平分別升高7.63、8.34倍，mRNA水平HIF-1α、GLUT-1、VEGF分別升高32.1％、3.827

9、和1.800倍。胰島素信號傳遞方面，低氧組IRS-1蛋白水平較對照組顯著降低，僅為對照的10.55％，Akt(Ser473)和Akt(Thr308)磷酸化也顯著降低。低氧組脂肪細(xì)胞培養(yǎng)基上清中炎癥因子水平顯著升高，TNF-α、MCP-1分別升高35％、21％，脂肪細(xì)胞TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1等4種炎癥因子mRNA水平分別升高29％、76％、81％和73％。低氧組脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素蛋白質(zhì)和mRNA水平分別降低約75％和45

10、％，瘦素mRNA水平則升高88％。低氧處理組培養(yǎng)基甘油（7.66±1.50 VS.4.39±1.08μmol/L; t=-3.058，P＜0.05）和FFA水平(7.15±0.10 VS.2.78±0.07μmol/L;t=-61.958，P＜0.001)均顯著上升提示脂解增加。低氧處理組PPAR-γ、C/EBPα、FATP1、CD36、FABP4等脂代謝有關(guān)基因mRNA水平均顯著降低，分別為對照組的42.57％、41.23％、52.6

11、7％、35.35％和50.23％(t值分別為9.948，4.69，5.364，6.126,12.785;P值分別為P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001）。
　　 結(jié)論：缺氧對于脂肪細(xì)胞功能可產(chǎn)生廣泛的影響和干擾。缺氧可通過影響IRS-1的表達(dá)和Akt的磷酸化阻礙胰島素信號的傳遞而直接導(dǎo)致胰島素抵抗?？纱龠M脂肪細(xì)胞TNF-α等炎癥因子的產(chǎn)生和分泌;可抑制脂聯(lián)素并增加瘦素的表達(dá)。缺氧還可誘發(fā)脂解，并