三七皂甙Rg1對(duì)慢性血栓栓塞性肺動(dòng)脈高壓和心肌重構(gòu)的調(diào)控及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分、三七皂甙Rg1對(duì)慢性血栓栓塞性肺動(dòng)脈高壓的調(diào)控
　　目的：復(fù)制慢性血栓栓塞性肺動(dòng)脈高壓(Chronic thromboembolismpulmonary hypertension，CTEPH)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，通過觀察肺動(dòng)脈血管在PNSRg1干預(yù)前后組織結(jié)構(gòu)、血流動(dòng)力學(xué)的變化來探討CTEPH肺動(dòng)脈血管重構(gòu)的發(fā)病機(jī)制及PNSRg1的保護(hù)效應(yīng)。
　　方法：
　　1.利用二次血栓栓塞法復(fù)制CTEPH的動(dòng)物模型。將SD大

2、鼠分成4組，腹腔注射0.9％NS或PNSRg1:A組:正常大鼠+0.9％NS;B組:正常大鼠+PNSRg1;C組:CTPH模型+0.9％NS;D組:CTPH模型+PNSRg1。共計(jì)四周。
　　2.血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)心率、肺動(dòng)脈壓力。
　　3.肺組織進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色觀察肺組織光鏡下病理改變、肺動(dòng)脈管壁和內(nèi)皮細(xì)胞改變。
　　4.彈力纖維VG染色，觀察肺小動(dòng)脈血管平滑肌厚度和血管外周直徑的比值(％WT)。
　　

3、5.電鏡觀察肺小動(dòng)脈內(nèi)膜、中膜平滑肌超微結(jié)構(gòu)改變。
　　6.免疫組化檢測(cè)肺動(dòng)脈Collagen-Ⅰ、MMP-9、PCNA、SMα-actin的表達(dá)。
　　7.Western Blot檢測(cè)肺組織eNOS，eNOSser1177的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.PNSRg1干預(yù)對(duì)實(shí)驗(yàn)各組大鼠心率沒有影響（P＞0.05）;C組CTEPH的平均肺動(dòng)脈壓力(mPAP)達(dá)34.27±4.21mmHg，明顯高于A、B組(P=0.0

4、00);D組經(jīng)過PNSRg1干預(yù)可以減輕CTEPH的平均肺動(dòng)脈壓為28.62+4.58 mmHg(P=0.004)。
　　2.光鏡下A、B組肺組織結(jié)構(gòu)無明顯異常改變，C、D組出現(xiàn)明顯的炎性實(shí)變，肺組織膨脹不全，肺泡萎陷，肺泡腔及肺間質(zhì)其內(nèi)見炎細(xì)胞浸潤(rùn)，而C、D之間無明顯的差別;而C組小動(dòng)脈壁及周圍有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，內(nèi)膜增生，中膜增厚，血管腔狹窄變小甚至閉塞;經(jīng)過PNSRg1干預(yù)后的D組上述改病變明顯減輕，介于A、B組與C組之間。<

5、br>　　3.VG染色顯示，C組肺動(dòng)脈中層平滑肌明顯增厚，其％WT(13.5±1.1％)為正常對(duì)照A組的2.18倍，差異具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。PNSRg1干預(yù)后D組(8.3±0.8)肺動(dòng)脈平滑肌較C組明顯變薄，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），但仍然厚于A、B組（P=0.041）。
　　4.(1)A組、B組肺小動(dòng)脈內(nèi)膜內(nèi)皮細(xì)胞扁平，排列緊密規(guī)則，染色體均勻，基底膜完整;C組細(xì)胞呈明顯立方狀或柱狀分布，細(xì)胞間

6、排列疏松，胞漿空泡化明顯，細(xì)胞器數(shù)目減少，細(xì)胞核增大，染色體分葉，基底膜不完整，有斷裂現(xiàn)象。D組病理改變介于A、B組與C組之間;(2)肺小動(dòng)脈中膜:A組:平滑肌細(xì)胞以1層扁平細(xì)胞多見，細(xì)胞之間排列緊密，B組之表現(xiàn)近似;C組，平滑肌細(xì)胞明顯增多，可達(dá)3-4層，細(xì)胞層柱狀排列，變肥大，細(xì)胞間連接疏松，并有間質(zhì)成分沉積，細(xì)胞核有空泡表現(xiàn)，染色質(zhì)稀疏，部分平滑肌細(xì)胞有突破基底膜進(jìn)入內(nèi)膜下傾向，中膜層增厚明顯;D組病理改變介于A、B組與C間。

7、r>　　5.(1)PCNA在肺動(dòng)脈內(nèi)膜A組、B組有低水平表達(dá)，而在C組內(nèi)膜PCNA明顯表達(dá)增加(3.83±0.45)，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);D組(3.02±0.24) PCNA表達(dá)低于C組(P＜0.05)，但明顯高于A組、B組;A、B組動(dòng)脈內(nèi)膜無SMα-actin的陽性表達(dá)，僅在中膜平滑肌細(xì)胞有表達(dá);而C組內(nèi)膜增厚且出現(xiàn)明顯增多的陽性表達(dá)顆粒，D組內(nèi)膜雖然也有表達(dá)但較C組少。(2)Collagen-Ⅰ在C組、D組的表達(dá)均

8、高于A、B組(P＜0.01)，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，經(jīng)過PNSRg1干預(yù)后D組較C組表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);A、B間組肺動(dòng)脈壁MMP-9的表達(dá)沒有明顯差異（P＞0.05），其表達(dá)水平在C組(3.56±0.31)明顯減低，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），經(jīng)過PNSRg1干預(yù)后D組(4.87±0.12) MMP-9的表達(dá)較C組增加(P＜0.05)，但仍然低于A、B組（P＜0.05）。
　　6.C組eNOS

9、，eNOSSer1177蛋白的表達(dá)水平低于A、B組(P＜0.05)，經(jīng)過PNSRg1干預(yù)后，D組其表達(dá)水平明顯上調(diào)（P＜0.01），但仍然低于A、B組(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.利用二次血栓栓塞法復(fù)制的大鼠慢性血栓栓塞性肺動(dòng)脈高壓模型是成功的，經(jīng)過PNSRg1干預(yù)治療后，m PAP、肺動(dòng)脈中層平滑肌厚度、內(nèi)膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)完整性、中膜平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜下移行傾向等均出現(xiàn)明顯的改善。這說明PNSRg1對(duì)阻遏CTE

10、PH動(dòng)脈血管壁的重構(gòu)干預(yù)是有效的。
　　2.CTEPH肺動(dòng)脈內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)的破壞，是導(dǎo)致中膜平滑肌細(xì)胞增殖并內(nèi)膜遷徙的重要原因，該過程可以受到PNSRg1的有效干預(yù)。
　　3.肺動(dòng)脈平滑肌表型的轉(zhuǎn)換和增殖是CTEPH肺動(dòng)脈重構(gòu)的重要機(jī)制之一，PNSRg1可以通過調(diào)控肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞周期轉(zhuǎn)換來調(diào)控其增殖和表型轉(zhuǎn)換。
　　4.肺小動(dòng)脈管壁細(xì)胞外基質(zhì)沉積增加和降解減少也有助于肺動(dòng)脈高壓的形成，PNSRg1可以有效減少其沉積促進(jìn)

11、其降解而發(fā)揮抗重構(gòu)作用。
　　5.PNSRg1干預(yù)可以在某種程度上逆轉(zhuǎn)CTEPH出現(xiàn)的eNOS和eNOSSer1177下調(diào)，促進(jìn)NO的合成，舒張肺動(dòng)脈，降低肺動(dòng)脈高壓和改善肺動(dòng)脈重構(gòu)的作用。
　　第二部分、三七皂甙Rg1對(duì)大鼠慢性血栓栓塞性肺動(dòng)脈高壓右室心肌重構(gòu)的影響
　　目的：構(gòu)建慢性血栓栓塞性肺動(dòng)脈高壓心肌重構(gòu)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，通過研究心肌在PNSRg1干預(yù)前后組織結(jié)構(gòu)、血流動(dòng)力學(xué)、氧化應(yīng)激的改變，來探討PNSRg1對(duì)

12、右室心肌重構(gòu)的調(diào)控作用及可能機(jī)制。
　　方法：
　　1.利用二次血栓栓塞法建立慢性血栓栓塞性肺動(dòng)脈高壓模型，4周后肺動(dòng)脈高壓模型大鼠被隨機(jī)分組，接受腹腔注射0.9％生理鹽水或三七皂甙。A組:正常對(duì)照大鼠+0.9％生理鹽水;B組:正常對(duì)照大鼠+PNSRg1;C組:CTPH模型+0.9％生理鹽水;D組:CTPH模型+PNSRg1;共計(jì)4周。
　　2.測(cè)定各組血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，包括右心室收縮壓，右室RV/LV游離壁厚度比3.雙

13、抗體夾心法測(cè)定血清中大鼠丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平4.HE、V.G染色光鏡下觀察組織形態(tài)學(xué)的改變;彩色病理圖文分析系統(tǒng)行圖像分析和膠原含量測(cè)定。應(yīng)用SPSS12.0軟件包行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理5.Western Blot檢測(cè)心肌基質(zhì)金屬蛋白酶-2的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.C組與對(duì)照組A組、B組比較，右室收縮壓、右室RV/LV游離壁厚度比明顯增加（P＜0.05=;心肌間質(zhì)膠原增生明顯;PNSRg1干預(yù)后D組右心室

14、收縮壓、右室RV/LV游離壁厚度比及心肌間質(zhì)膠原增生較C組減輕。
　　2.C組血清血清丙二醛(MDA)明顯增加(P＜0.01)，而超氧化物歧化酶(SOD)活性明顯降低(P＜0.01)， A、B組間無差別(P＞0.05);PNSRg1可降低D組血清MAD(P＜0.05)，明顯提高血清SOD活性(P＜0.01)。
　　3.C組刪P-2的表達(dá)較A、B組都降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);NSRg1干預(yù)D組后上調(diào)PMMP-2的