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文檔簡介
1、目的
子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率近年呈現(xiàn)上升趨勢,嚴重影響女性生命健康。目前有研究顯示microRNA(miRNA)表達的失調(diào)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。我們的前期研究已經(jīng)證實microRNA-30c(miR-30c)在子宮內(nèi)膜癌中以腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因-1(MTA-1)為靶基因,參與子宮內(nèi)膜癌細胞株增殖及侵襲能力的調(diào)節(jié)。本研究旨在深入探究子宮內(nèi)膜癌中miR-30c的抑癌作用及其與靶基因MTA-1間的關(guān)系,并進一步探討雌激素對兩者表達的
2、調(diào)控作用,為miR-30c成為提示子宮內(nèi)膜癌預后相關(guān)分子標志物及治療靶點奠定基礎(chǔ)。
方法
收集南京鼓樓醫(yī)院子宮內(nèi)膜癌手術(shù)病人的腫瘤組織(21例)及因非惡性因素行子宮切除術(shù)患者的正常內(nèi)膜組織(14例),Realtime-PCR技術(shù)測定miR-30c在不同內(nèi)膜組織中以及不同子宮內(nèi)膜癌細胞株中的表達情況。體外培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞株利用LipfectamineTM2000分別介導miR-30c的mimics(m
3、iR-mi)、inhibitor(miR-in)及MTA-1siRNA(si-MTA-1)轉(zhuǎn)染入Ishikawa細胞,并分別以各自的以無義隨機序列scramble作為陰性對照,Realtime-PCR技術(shù)檢測miR-30c及MTA-1表達水平的變化;Westernblot技術(shù)檢測MTA-1蛋白質(zhì)表達的變化;并應(yīng)用MTT比色法檢測細胞增殖能力,人工重組基底膜侵襲小室(Transwell)檢測細胞侵襲能力。雌激素作用于Ishikawa及HE
4、C-1-B細胞后Realtime-PCR技術(shù)檢測miR-30c及MTA-1表達水平的變化。
結(jié)果
1、miR-30c在腫瘤組織中低表達于正常內(nèi)膜組織,在ER陽性的Ishikawa細胞中低表達于ER陰性的HEC-1-B細胞,而MTA-1在不同細胞株中的表達與miR-30c負相關(guān)。
2、上調(diào)及下調(diào)miR-30c表達,分別降低及增加了MTA-1蛋白的表達,并且MTA-1表達的降低可以負反饋調(diào)節(jié)miR-30c,使得
5、其表達上調(diào)。
3、上調(diào)miR-30c可以抑制子宮內(nèi)膜癌細胞株的增殖、遷移及侵襲能力,并通過共轉(zhuǎn)染實驗證實miR-30c通過直接作用于MTA-1起調(diào)控作用。
4、雌激素通過不同的方式作用于Ishikawa及HEC-1-B細胞株分別下調(diào)miR-30c表達及上調(diào)MTA-1的表達。
結(jié)論
本研究證實miR-30c在子宮內(nèi)膜癌組織中低表達,并且通過直接調(diào)控MTA-1表達而起到抑癌作用。另外,雌激素是miR-
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