Ⅰ型與Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌差異表達(dá)microRNA的篩選及其靶基因的研究.pdf

1、目的:篩選Ⅰ型和Ⅱ型人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中差異表達(dá)的miRNA并預(yù)測(cè)和初步驗(yàn)證其靶基因。 方法:(1)通過體內(nèi)成瘤病理學(xué)檢查、免疫組化檢測(cè)ER、PR、p53和Ki-67的表達(dá)、對(duì)雌孕激素作用的反應(yīng)來鑒定兩個(gè)細(xì)胞系Ishikawa和KLE的分型；(2)無雌孕激素環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞系Ishikawa和KLE，提取總RNA進(jìn)行miRNA芯片檢測(cè)和基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)；提取總蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析；(3)用miRANDA和TargetScan軟

2、件結(jié)合芯片和蛋白質(zhì)分析結(jié)果，預(yù)測(cè)差異表達(dá)的miRNA可能的靶基因；(4)選擇可能分別以ESR1和PGR為靶基因的miRNA100、99a和miRNA378、768-3p，用Real-Time RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證在體內(nèi)和體外培養(yǎng)的兩個(gè)細(xì)胞系以及10例人內(nèi)膜癌標(biāo)本中其表達(dá)的差異性。 結(jié)果:經(jīng)鑒定確認(rèn)Ishikawa來源于Ⅰ型內(nèi)膜癌，KLE甩來源于Ⅱ型內(nèi)膜癌；miRNA芯片篩選出兩個(gè)細(xì)胞系中差異表達(dá)的miRNA共126個(gè)；基因表達(dá)譜

3、芯片篩選出兩個(gè)細(xì)胞系中差異表達(dá)的基因共3355個(gè)；蛋白質(zhì)組學(xué)分析在兩個(gè)細(xì)胞系中共鑒定出差異表達(dá)的蛋白14個(gè)；鑒定出的蛋白和免疫組化檢測(cè)的共18個(gè)蛋白中有13個(gè)預(yù)測(cè)到可能以其為靶基因的目標(biāo)miRNA；Real-Time RT-PCR驗(yàn)證出hsa-miR-100在Ⅰ型組病理標(biāo)本中的表達(dá)顯著低于Ⅱ型組，miRNA100、99a、378、768-3p在體外和體內(nèi)培養(yǎng)的細(xì)胞系Ishikawa和KLE中的差異表達(dá)基本一致。 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)在兩