MTA1對子宮內(nèi)膜癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響.pdf

1、目的:
　　轉(zhuǎn)移相關基因1(metastasis-associated-genel)MTA1是近年來發(fā)現(xiàn)的與腫瘤發(fā)生，侵襲及轉(zhuǎn)移密切相關的基因，通過參與細胞核重構(gòu)和脫乙酰基復合物(nucleosomeremodelingandhistonedeaeetylase，NuRD)的組成，在細胞的信號轉(zhuǎn)導，染色質(zhì)重構(gòu)，及轉(zhuǎn)錄的過程中發(fā)揮其生物學效應，進一步影響癌細胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力。研究發(fā)現(xiàn)MTA1在肺癌、肝癌、胰腺癌、食管癌等多種惡性腫

2、瘤中呈現(xiàn)高表達，且與其侵襲轉(zhuǎn)移能力密切相關，但在子宮內(nèi)膜癌中的研究目前國內(nèi)外尚不多見，本研究通過研究不同子宮內(nèi)膜組織中MTA1表達差異，通過siRNA(小干擾RNA)抑制MTA1在子宮內(nèi)膜癌細胞系HEC-1-A中的表達，初步探討MTA1在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生及侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用，為子宮內(nèi)膜癌的基因治療提供新的靶點及理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.采用免疫組織化學SP法檢測449例子宮內(nèi)膜組織中MTA1的表達水平，其中正常子宮內(nèi)膜

3、組織100例，不典型增生子宮內(nèi)膜組織49例，子宮內(nèi)膜癌組織300例，卡方檢驗分析比較此三組MTA1表達水平差異，分析MTA1表達水平與子宮內(nèi)膜癌分化程度、臨床分期、肌層浸潤深度的關系。
　　2.通過脂質(zhì)體介導方法，將特異性siRNA表達載體psilencer2.0-MTA1-siRNA轉(zhuǎn)染入人子宮內(nèi)膜癌細胞系HEC-1-A，以轉(zhuǎn)染無關序列組psilencer2.0-neg及未轉(zhuǎn)染組(non-transfected)做對照，將各組細

4、胞進行常規(guī)培養(yǎng)。
　　3.采用RT-PCR以及western-blot檢測特異性siRNA對MTA1基因mRNA及蛋白表達的抑制效果。
　　4.應用劃痕損傷實驗及transwell實驗檢測MTA1對子宮內(nèi)膜癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響，以及驗證體外應用RNA干擾技術以MTA1為靶點抑制子宮內(nèi)膜癌細胞侵襲及轉(zhuǎn)移的可行性。
　　結(jié)果:
　　1.MTA1在正常子宮內(nèi)膜，不典型增生子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌組織中的表達水平存在明顯

5、差異，在癌組織中呈現(xiàn)顯著的過表達，且與子宮內(nèi)膜癌不同的組織學分級負相關，與不同的肌層浸潤深度及臨床分期中呈現(xiàn)正相關，且組間差異有統(tǒng)計學意義。
　　2.RT-PCR結(jié)果顯示，沉默MTA1基因后，其mRNA的水平顯著降低，說明特異性的siRNA成功抑制了MTA1的轉(zhuǎn)錄，阻斷了其mRNA的表達；western-blot結(jié)果顯示，沉默MTA1基因后，其蛋白的水平顯著降低，說明特異性的siRNA成功抑制了MTA1的翻譯，阻斷了其蛋白的表達。

6、
　　3.劃痕損傷實驗顯示轉(zhuǎn)染后劃痕損傷愈合明顯減慢，遷移率明顯降低，transwell體外侵襲實驗結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后穿膜細胞百分率顯著降。
　　結(jié)論:
　　1.MTA1表達水平的增高與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、分化程度、臨床分期及肌層浸潤深度密切相關，可能在其發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，有望成為預測子宮內(nèi)膜癌發(fā)生及浸潤轉(zhuǎn)移的有效生物學標志，為子宮內(nèi)膜癌的診斷及治療提供依據(jù)。
　　2.體外實驗顯示，應用脂質(zhì)體介導的RNA