全反式維甲酸誘導HL-60細胞粒系分化中miRNA-26的表達變化.pdf

1、研究背景：急性髓系白血病(AML)是一組臨床和生物學行為存在高度異質性的疾病。AML的發(fā)生是由髓系白細胞增殖失控、分化障礙和凋亡抑制所致，這其中涉及一系列基因的改變，如染色體易位、重排、點突變、缺失、基因修飾如甲基化等，導致癌基因的激活和抑癌基因的失活。近年來，隨著人們對表觀遺傳學認識的深入，尤其是去甲基化藥物阿扎胞苷(azacitidine)及其脫氧衍生物5-氮雜2′-脫氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine)在治療腫瘤

2、患者的成功臨床應用，表觀遺傳學逐漸成為腫瘤研究的熱點。
　　 MicroRNA(miRNA)是生物體內源長度約為18-25個核苷酸的非編碼小RNA，通過表觀遺傳的方式調控生物體的正常生長、發(fā)育、衰老、死亡，以及疾病的病理過程。作為一個廣泛存在的可對基因表達進行微調的分子，其在急性髓系白細胞增殖和分化中的意義近年來開始受到關注。誘導白血病細胞重新分化是白血病治療的主要策略之一，使用全反式維甲酸(all-trans retinoic

3、 acid,ATRA)能使70-80％以上的急性早幼粒細胞性白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)患者得到完全緩解，而聯合化療可獲得長期緩解，甚至有可能治愈。而miRNAs參與APL細胞分化的調控機制還未完全闡明，尤其是對于PML-RARα融合基因陰性的急性髓系白血病細胞。因此，本實驗應用實時熒光定量聚合酶鏈反應技術(real-time fluorescence quantitative polyme

4、rase chain reaction,real-time PCR)對miR-26在ATRA誘導急性髓系白血病細胞HL-60粒系分化中的表達進行研究，為了解miR-26在分化調控過程中的作用機制提供實驗依據。
　　 目的：探討全反式維甲酸(ATRA)誘導HL-60細胞分化對miR-26表達的影響。
　　 方法：以全反式維甲酸(1μM)影響下不同時間的HL-60細胞為檢測對象，采用顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學改變；流式細胞儀檢測

5、細胞表面分化標志CD15；Rea1-time PCR檢測不同時段miR-26的表達變化。
　　 結果：1)隨著藥物誘導時間的延長，被誘導的HL-60細胞向粒系分化，并出現細胞核形的改變；2)與對照組相比，ATRA作用3d、4d、5d和6d后，流式細胞儀檢測HL-60細胞的分化率分別(52.39±3.56)％、(77.65±0.24)％、(83.90±1.30)％、(68.13±1.67)％,(P＜0.01)；3)Real-tim