辛伐他汀對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分泌炎癥介質(zhì)的影響.pdf

1、目的： 他汀類(Statins)藥物屬于3-羥-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMG-CoA)抑制劑，可以降低血清膽固醇的含量，是治療高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化的藥物中最有效的一類。越來(lái)越多的研究表明，他汀類藥物降低心血管疾病的發(fā)病率和死亡率不僅僅依靠其降脂作用，除此以外還有多種藥理作用，如改善血管內(nèi)皮、促進(jìn)纖溶、抗血栓形成等等。近年來(lái)，有關(guān)他汀類藥物抗炎作用的研究日漸增多，其抗炎作用的發(fā)現(xiàn)表明，在臨床中應(yīng)用他汀類藥物治療動(dòng)脈粥樣硬化

2、除依靠降脂作用外還有其他的益處，但是目前具體的抗炎機(jī)制尚不明確。 白細(xì)胞介素6、8(interleukine6，8 IL-6，IL-8)、腫瘤壞死因子α(tumornecrosis factor αTNFα)、尿激酶型纖溶酶原激活物及其受體(urokinaseplasminogen activator/urokinase plasminogen activator receptor，uPA/uPAR)均可由內(nèi)皮細(xì)胞分泌和表達(dá)，在

3、炎癥反應(yīng)中，血管內(nèi)皮細(xì)胞受刺激或損傷后可以導(dǎo)致這幾種炎癥介質(zhì)的表達(dá)和釋放增多，從而激活和趨化白細(xì)胞、介導(dǎo)白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的黏附、促進(jìn)白細(xì)胞的遷移等，因此，IL-6、IL-8、TNFα、uPA/uPAR在炎癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演重要的角色。 本次實(shí)驗(yàn)利用炎癥刺激因子一脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)

4、炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8、TNFα、uPA/uPAR的分泌和表達(dá)，并觀察辛伐他汀對(duì)幾種炎癥介質(zhì)表達(dá)的影響，從而為進(jìn)一步研究他汀類藥物的抗炎作用機(jī)制提供理論依據(jù)。方法1.細(xì)胞培養(yǎng)：取新鮮臍帶，分離人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，培養(yǎng)，鑒定，傳代，第2-3代的細(xì)胞用來(lái)實(shí)驗(yàn)。 2.細(xì)胞分組：將細(xì)胞隨機(jī)分成4組：①對(duì)照組；②LPS組(100ng/ml)；③辛伐他汀組(5μg/ml)；④LPS+辛伐他汀組。細(xì)胞分別處理1h、12h、24h后，取細(xì)胞上

5、清液做ELISA檢測(cè)，同時(shí)將細(xì)胞凍存留做熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)。 3.取細(xì)胞上清液，分別做IL-6、IL-8、TNF-α的ELISA檢測(cè)，紀(jì)錄結(jié)果。 4.收集細(xì)胞，分別抽取mRNA，反轉(zhuǎn)錄cDNA，進(jìn)行熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)IL-6、IL-8、TNF-α以及uPA/uPAR的mRNA表達(dá)，紀(jì)錄結(jié)果。 5.上述實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果： 1.人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞鑒定結(jié)果：形態(tài)

6、學(xué)鑒定，相差顯微鏡下，內(nèi)皮細(xì)胞分布均勻，單層生長(zhǎng)，形態(tài)為多角形，鵝卵石狀鑲嵌排列；內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫熒光檢測(cè)鑒定，熒光顯微鏡下，內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中可見(jiàn)大量黃綠色熒光。鑒定結(jié)果為人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。 2.ELISA結(jié)果：對(duì)照組細(xì)胞，在不施加任何刺激的情況下可以少量分泌IL-6、IL-8、TNF-α；LPS刺激組(100ng/ml)細(xì)胞，IL-6、IL-8、TNF-α的分泌量比對(duì)照組明顯增加，且有顯著性差異(p＜0.01)；辛伐他

7、汀與LPS共孵育組IL-6、IL-8、TNF-α分泌量明顯比LPS刺激組減少，且有顯著性差異(p＜0.01)。 3.實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果：LPS刺激組(100ng/ml)細(xì)胞，IL-6、IL-8、TNF-α以及uPA/uPAR的mRNA表達(dá)比對(duì)照組明顯增強(qiáng)，且有顯著性差異(p＜0.05)；辛伐他汀與LPS共孵育組IL-6、IL-8、TNF-α以及uPA/uPAR的mRNA表達(dá)明顯比LPS刺激組減少，且有顯著性差異(p＜0.05)。