芪蛭皺肺顆粒對LPS致炎肺泡Ⅱ型上皮細胞抗菌肽表達的影響.pdf

1、目的:本研究對新生大鼠肺泡II型上皮細胞(alveolar type II epithelial cell, AT-II)進行原代培養(yǎng)與鑒定,通過芪蛭皺肺顆粒在體外的干預(yù)實驗,觀察芪蛭皺肺顆粒對LPS致炎肺泡II型上皮細胞中抗菌肽表達的影響,探討其對COPD的防治機制,為COPD的診治提供新的思路和措施,同時為臨床開發(fā)研究芪蛭皺肺顆粒提供藥效學基礎(chǔ)。
　　方法:采用酶消化法分離SPF級新生wistar大鼠的肺泡II型上皮細胞,進行

2、原代培養(yǎng),觀察細胞形態(tài)及生長特點,采用透射電鏡觀察、HE染色、堿性磷酸酶染色和改良巴氏染色等方法來鑒定肺泡II型上皮細胞的特異性細胞結(jié)構(gòu),并測定AT-II細胞純度及活力。在AT-II細胞順利完成原代培養(yǎng)的前提下,以40μg/ml的LPS刺激AT-II細胞發(fā)生炎癥反應(yīng),構(gòu)建脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致炎肺泡II型上皮細胞模型。分別添加高、中、低劑量(200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml)的芪蛭皺肺

3、顆粒,培養(yǎng)48小時;檢測各組細胞LDH活力、TNF-α和抗菌肽LL-37 mRNA和蛋白的表達。
　　結(jié)果:(1)對AT-II細胞進行形態(tài)學觀察,生長狀態(tài)良好;經(jīng)過對細胞超微結(jié)構(gòu)與特異性的鑒定,確定AT-II細胞原代培養(yǎng)成功;
　　(2)當LPS濃度從0加至40μg/ml時,細胞的異常增值率逐漸升高,但當LPS濃度為60μg/ml時,引起細胞急性壞死,因此確定誘導AT-II細胞炎癥反應(yīng)的LPS最適濃度為40μg/ml;

4、>　　(3)芪蛭皺肺顆粒能夠顯著降低LPS致炎的肺泡II型上皮細胞的應(yīng)激反應(yīng),其中200μg/ml的芪蛭皺肺顆粒濃度效果最佳;
　　(4)芪蛭皺肺顆粒能顯著降低細胞的TNF-α濃度(P<0.05),說明芪蛭皺肺顆粒能夠顯著降低LPS致炎的肺泡II型上皮細胞的炎癥反應(yīng);
　　(5)空白組AT-II細胞的LL-37 mRNA的表達水平較其他各組明顯較低(P<0.05),而模型對照組AT-II細胞的LL-37 mRNA的表達水平明

5、顯高于芪蛭皺肺顆粒干預(yù)組;
　　(6)空白組AT-II細胞的LL-37蛋白表達水平較其他各組明顯較低(P<0.05),而芪蛭皺肺顆粒各干預(yù)組AT-II細胞的LL-37蛋白表達水平明顯低于模型對照組(P<0.05),同時芪蛭皺肺顆粒高劑量組AT-II細胞的LL-37蛋白表達水平明顯低于芪蛭皺肺顆粒低劑量組(P<0.05)。
　　結(jié)論:(1)利用酶消化法對乳鼠肺組織進行分離、培養(yǎng),能夠完成AT-II細胞的原代培養(yǎng),經(jīng)鑒定,確定A