抗白介素-6受體單克隆抗體對LPS誘導(dǎo)的大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用.pdf

1、目的:通過建立LPS誘導(dǎo)體外原代培養(yǎng)的大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡的損傷模型，觀察抗IL-6R單克隆抗體對大鼠肺泡II型上皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。 方法分離、純化、電鏡鑒定的大鼠肺泡II型上皮細(xì)胞，培養(yǎng)子24孔培養(yǎng)板中，每孔1×106個細(xì)胞，原代培養(yǎng)23h后，按如下方式分5組(每組4個復(fù)孔)：A組：空白對照組，僅含DMEM培養(yǎng)基；B組；LPS損傷組，DMEM培養(yǎng)基+LPS10μg/ml；C組：DMEM培養(yǎng)基+LPS10μg/ml組十抗

2、IL-6R單克隆抗體5μg/ml；D組：DMEM培養(yǎng)基+LPS10μg/ml組十抗IL-6R單克隆抗體10μg/ml；F組：DMEM培養(yǎng)基+LPS10μg/ml組十抗IL-6R單克隆抗體20μg/ml。培養(yǎng)48小時后，收集細(xì)胞行PI單染法流式細(xì)胞儀(FCM)凋亡檢測，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-6、TNF-α的含量，記錄結(jié)果。 結(jié)果:流式細(xì)胞儀檢測顯示，與A組相比，B組、C組、D組、E組肺泡II型上皮細(xì)

3、胞凋亡率顯著增加，而C組、D組、E組同B組相比肺泡II型上皮細(xì)胞凋亡率顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示抗IL-6R單克隆抗體對肺泡II型上皮細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用。本研究同時分析了肺泡II型上皮細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-6和TNF-α濃度，發(fā)現(xiàn)與A組相比，B組、C組、D組、E組IL-6和TNF-α濃度顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義p<0.05)；C組、D組、E組IL-6和TNF-a濃度分別與B組比較以及C組、D組、E組三組間IL