三七總皂甙對骨髓基質(zhì)細(xì)胞成骨分化的影響及機(jī)制研究.pdf

1、研究背景及目的:
　　 隨著人類壽命在不斷延長，人口年齡結(jié)構(gòu)的老齡化日漸突出，骨質(zhì)疏松癥成為危害人類健康的主要問題，其防治是日益受到關(guān)注的問題。已有大量研究表明許多中藥有促進(jìn)骨折愈合和防治骨質(zhì)疏松的功效。本實(shí)驗探討三七總皂甙（Panax Notoginseng Saponins，PNS)對骨髓基質(zhì)細(xì)胞（Bone Marrow Stromal Cells，BMSCs）成骨分化的調(diào)節(jié)及機(jī)制研究。
　　 為骨質(zhì)疏松癥的防治提供

2、依據(jù)。
　　 研究方法:
　　 一、PNS 對BMSCs 成骨分化的影響研究：采用全骨髓貼壁法從雄性SD 大鼠雙側(cè)后肢骨髓組織中分離獲取BMSCs，取第三代BMSC分別用不同培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),對照組(C)(DMEM培養(yǎng)液含10%胎牛血清),成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基(I)(含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)液中加入10 nM地塞米松、10 mM β-磷酸甘油、100μg/ml 維生素C)，和成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)分別加入終濃度含10mg/L、

3、50mg/L、100mg/L和200mg/L PNS 培養(yǎng)液組（分別標(biāo)記10P、50P、100P、200P）。采用MTT 法測定BMSCs的增殖能力。通過茜素紅，堿性磷酸酶等成骨標(biāo)志物來檢測成骨能力。運(yùn)用RT－PCR 技術(shù)檢測核結(jié)合因子、堿性磷酸酶、骨涎蛋白和過氧化物酶體增殖物激活受體γ的mRNA 表達(dá)。
　　 二、PNS 調(diào)節(jié)BMSCs 成骨分化的機(jī)制研究：第三代BMSC分別在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基（I）、100mg/LPNS的成骨培

4、養(yǎng)基（100P）和100mg/LPNS的成骨培養(yǎng)基加入JNK 抑制劑SP600125，p38MAPK 抑制劑SB203580，ERK1/2 抑制劑PD98059 三種不同MAPK 通路抑制劑(分別標(biāo)記100P+SP、100P+SB、100P+PD)。通過茜素紅，堿性磷酸酶等成骨標(biāo)志物來檢測成骨能力。
　　 運(yùn)用RT－PCR 技術(shù)檢測核結(jié)合因子、堿性磷酸酶、骨涎蛋白和過氧化物酶體增殖物激活受體γ的mRNA 表達(dá)。
　　 研

5、究結(jié)果:
　　 一、PNS 對BMSCs 成骨分化的影響研究：PNS 呈濃度依賴性促進(jìn)BMSCs的增殖、ALP活性、鈣結(jié)節(jié)形成，其中以濃度為100mg/LPNS 作用最為顯著。RT－PCR 結(jié)果：100mg/LPNS骨誘導(dǎo)液組其核結(jié)合因子、堿性磷酸酶、骨涎蛋白的mRNA 表達(dá)最高，而過氧化物酶體增殖物激活受體γ的mRNA 表達(dá)最低。
　　 二、PNS 調(diào)節(jié)BMSCs 成骨分化的機(jī)制研究：100p組及100P+Sp組茜素紅

6、鈣結(jié)節(jié)定量及堿性磷酸酶活性均優(yōu)于其它各組，兩組與其它各組比較均有顯著差異(P＜0.01)，而這兩組間對比沒有顯著差異(P＞0.05)。RT－PCR 結(jié)果：在各組不同培養(yǎng)液中，100mg/LPNS 骨誘導(dǎo)組其核結(jié)合因子、堿性磷酸酶、骨涎蛋白的mRNA 表達(dá)最高，100P+SB、100P+PD 組其mRNA 表達(dá)居中，比100p組低，比骨培養(yǎng)基組高。100p組過氧化物酶體增殖物激活受體γ的mRNA 表達(dá)最低，100P+SB、100P+PD