三七總皂甙對人肝癌細胞SMMC-7721的影響及分子機制.pdf

1、目的：探討三七總皂甙(Panax notoginseng saponins，PNS)對人肝癌細胞SMMC-7721增殖、凋亡的影響及其可能的分子機制。 方法：1.采用四唑鹽(MTT)比色法觀察不同濃度PNS對SMMC-7721細胞增殖的影響；2.流式細胞儀檢測細胞周期時相分布及細胞凋亡率；3.流式細胞儀間接免疫熒光染色分析不同濃度PNS作用后細胞p-ERKl／2、Bcl-2蛋白表達水平；4.采用劃痕標記／染料示蹤技術(shù)(scrap

2、e loading／dye transfer，SL／DT)觀察不同濃度PNS對SMMC-7721細胞GJIC功能的影響；5．采用RT-PCR方法分析不同濃度PNS對SMMC-7721細胞Cx32mRNA、hTERTmRNA表達的影響。 結(jié)果：1.MTT結(jié)果顯示，不同濃度PNS對細胞生長均有一定抑制作用，且同一時間各組與對照組相比均有顯著性差異(P<0.05);100mg/L、200mg／L、400mg／L PNS處理細胞24～7

3、2h后，抑制率由17.86％～28.57增加至25.71％～45.71％，25mg／L、50mg／L PNS對細胞抑制作用較弱，800mg／L PNS則可導致細胞壞死。2.細胞周期分析顯示，不同濃度PNS處理細胞72h后，與對照組相比，G<,0>/G<,1>期細胞明顯增多，S期和G<,2>／M期細胞減少，且PNS濃度越高，該作用越強，其中400mg／L PNS處理細胞72h后G<,0>／G<,1>期細胞高達87.42％；同時PNS還能誘

4、導SMMC-7721細胞凋亡，并呈明顯的劑量效應依賴關(guān)系。3.流式細胞儀間接免疫熒光染色分析結(jié)果顯示，不同濃度PNS處理細胞72h后，p-ERKl／2、Bcl-2蛋白表達陽性率分別由16.89％、89.46％降至7.15％、58.62％。4.sL／DT檢測發(fā)現(xiàn)，常規(guī)培養(yǎng)的SMMC-7721細胞，其Lucifer Yellow(LY)染料局限于劃痕兩側(cè)細胞內(nèi)，無明顯的熒光染料傳輸現(xiàn)象，GJIC陰性；而經(jīng)lOOmg／L、200mg／L、40

5、0mg／L PNS處理細胞72h后，SMMC-7721細胞GJIc功能有不同程度的恢復或增強，且隨PNS濃度增高，LY染料傳輸范圍逐漸增大，最遠可達3～4層細胞。5.RT-PCR結(jié)果顯示，不同濃度PNS處理細胞72h后，hTERTmRNA表達與對照組相比明顯降低(P<0.05)；而Cx32mRNA的表達在誘導前后則無明顯差別(P>0.05)。 結(jié)論：1．PNS可抑制SMMC-7721細胞增殖、誘導細胞凋亡，并能將細胞生長阻滯于G