大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞在體外誘導(dǎo)成骨成脂分化的實驗研究.pdf

1、目的：骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromal Cells，BMSCs)作為一種成體干細(xì)胞，具有一定的自我更新、高度增殖和多向分化的潛能。在適宜的條件下，可以誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞。BMSCs來源方便，取材較容易，體外培養(yǎng)和擴(kuò)增的技術(shù)條件簡便。本課題在建立大鼠BMSCs體外分離、培養(yǎng)、純化及擴(kuò)增體系的基礎(chǔ)上，研究BMSCs在體外培養(yǎng)中的生物學(xué)特性，以及向成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞分化的能力，為下一步人骨髓基質(zhì)細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)

2、奠定基礎(chǔ)，同時為進(jìn)一步在分子水平研究激素性骨質(zhì)疏松的病因及治療做探索和準(zhǔn)備。 方法：本實驗采用密度梯度離心法，利用BMSCs貼壁速率快的特點，使用percoll淋巴細(xì)胞分離液分離后，接種培養(yǎng)。反復(fù)換液純化。經(jīng)原代及傳代培養(yǎng)擴(kuò)增BMSCs后，研究其在體外培養(yǎng)中的生長曲線等生物學(xué)特性及對其鑒定，在此基礎(chǔ)上，使用不同濃度糖皮質(zhì)激素(10-6、10-7、10-8mol/L)配合成骨及成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)BMSCs向成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞分化，

3、進(jìn)行鈣結(jié)節(jié)染色、堿性磷酸酶染色和油紅O染色對成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞進(jìn)行鑒定。 結(jié)果：1．密度梯度離心法分離純化得到BMSCs，原代培養(yǎng)14天達(dá)70-80％后傳代，至3代時細(xì)胞趨于一致，2．本實驗采用不同濃度糖皮質(zhì)激素配合成骨及成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)BMSCs向成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞分化，觀察細(xì)胞胞漿內(nèi)有形態(tài)學(xué)的變化，免疫組織化學(xué)檢測驗證確實為成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞。 結(jié)論：1．在本實驗，密度梯度離心法分離純化骨鏈基質(zhì)細(xì)胞易于獲得，成活率