阿司匹林對體外培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成骨性分化的影響.pdf

1、骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis，OP)是以骨量減少、骨的微結(jié)構(gòu)退化為特征的，致使骨的脆性增加以及易于發(fā)生骨折的一種全身性骨骼疾病。骨質(zhì)疏松癥是年齡相關(guān)性疾病，人口老齡化程度越高，患病人數(shù)越多，骨質(zhì)疏松癥將嚴(yán)重危害中老年人群健康和生活質(zhì)量。我國是人口大國，也是老年人口絕對數(shù)量最多的國家之一，人口老齡化呈逐步加快之勢，骨質(zhì)疏松發(fā)病率逐年增高。雖然目前抗骨質(zhì)疏松藥物種類有很多，但都存在一些問題，如副作用較大，療效不顯著、費用高等。近年來

2、，根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查及有關(guān)報道發(fā)現(xiàn)，長期服用小劑量阿司匹林一年以上，能夠明顯提高老年人骨密度，預(yù)示阿司匹林具有潛在的抗骨質(zhì)疏松的效果。阿司匹林不但副作用少、廉價，而且治療疾病的范圍廣泛，是中老年人的常用藥。因此研究阿司匹林對骨質(zhì)疏松的預(yù)防與治療的確切療效具有重要意義，可能為阿司匹林運用于臨床抗骨質(zhì)疏松的治療提供理論依據(jù)。
　　目的：
　　探討阿司匹林對骨髓基質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）成骨性分化的影響，為進(jìn)一步將阿司匹林應(yīng)用于臨床骨

3、質(zhì)疏松治療奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　無菌條件下分離4周齡SD大鼠股骨和脛骨，提取骨髓并制成單細(xì)胞懸液，采用全骨髓貼壁法和細(xì)胞密度梯度分離法相結(jié)合的方式培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，獲得特性穩(wěn)定的3-6代BMSCs應(yīng)用于本實驗研究。通過成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)BMSCs成骨性分化，并在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入不同濃度阿司匹林（0.5、1、2、5、10mmol/L），分為低、中、高濃度組，同時設(shè)立對照組。觀察培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，采用CCK-8法分析細(xì)

4、胞增殖情況，繪制細(xì)胞生長曲線。使用ELISA等檢測方法比較阿司匹林組與對照組細(xì)胞堿性磷酸酶（ALP）活性以及骨鈣素（OC）分泌量的差異。應(yīng)用鈣結(jié)節(jié)染色、堿性磷酸酶染色觀察比較成骨效果，并通過半定量分析比較各組之間的差異。
　　結(jié)果：
　　通過全骨髓貼壁法和細(xì)胞密度梯度分離法相結(jié)合的方式，得到純度較高、特性穩(wěn)定的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，可以應(yīng)用于實驗研究。原代細(xì)胞多呈現(xiàn)為類圓形、短梭形、多角形或不規(guī)則形，可見細(xì)胞集落，大小不一。傳代細(xì)

5、胞體積較大，增殖速度快，細(xì)胞呈漩渦狀生長，多為梭形、三角形或多角形，細(xì)胞核橢圓形或圓形。從細(xì)胞生長曲線上分析，阿司匹林無明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖活性的作用，而且高濃度阿司匹林（＞5mmol/L）能夠強(qiáng)烈抑制細(xì)胞增殖。中低濃度組濃度阿司匹林（0.5、1、2mmol/L）可促進(jìn)BMSCs的成骨性分化，堿性磷酸酶含量、骨鈣素分泌量在不同階段顯著高于對照組；14天茜素紅染色可見中低濃度組鈣結(jié)節(jié)數(shù)量高于對照組；堿性磷酸酶染色顯示中低濃度組陽性細(xì)胞數(shù)量明顯