細胞角蛋白KRT18通過相互作用調控LRP16的亞細胞定位研究.pdf

1、軍醫(yī)進修學院;解放軍總醫(yī)院碩士學位論文細胞角蛋白KRT18通過相互作用調控LRP16的亞細胞定位研究姓名：尹肖云申請學位級別：碩士專業(yè)：婦產科學指導教師：孟元光;韓為東20090521軍醫(yī)進修學院碩士學位論文結論：①角蛋白K R T l 8 與L R P l 6 存在體內體外相互作用。②L R P l 6 和K R T l 8之間相互作用區(qū)域是K R T l 8 蛋白非螺旋化的球狀C 端結構域。③L R P l 6 通過C端唯一的結構域

2、與K R T l 8 相互作用。二、K R T l 8 對L R P l 6 亞細胞分布的影響目的：研究K R T l 8 對L R P l 6 亞細胞定位的影響。方法：①構建真核表達載體L R P l 6 ．p E G F P 。②將L R P l 6 - p E G F P 質粒瞬時轉染后，用熒光顯微鏡觀察L R P l 6的亞細胞定位。③L R P l 6 ．p E G F P 質粒與攜帶K R T l 8 基因的F l a g

3、- p C D N A 3 - K R T l 8質粒瞬時共轉染，熒光顯微鏡觀察K R T l 8 對L R P l 6 的亞細胞定位的影響。④W e s t e r n ．B l o t 法進一步驗證K R T l 8 對內源性L R P l 6 蛋白核漿分布的影響。結果-①成功構建p E G F P —L R P l 6 融合載體。②熒光顯微鏡觀察L R P l 6 綠色熒光融合蛋白在N I H 3 T 3 細胞呈漿型分布為主，在M

4、 C F ．7 細胞呈核型分布為主。④L R P l 6 ．p E G F P 與K R T l 8 共同轉導N I H 3 T 3 和M C F - 7 細胞后熒光顯微鏡觀察發(fā)現L R P l 6 明顯趨向于細胞漿分布。@ W e s t e r n b l o t 分析證實過表達K R T l 8 會介導內源性L R P l 6 由胞核趨向胞漿分布。⑤小干擾s i R N A 技術證實在沉默K R T l 8的表達會抑制L R P

5、l 6 由胞核向胞漿穿梭。結論- ①L R P l 6 在上皮性腫瘤細胞中表達產物主要分布于細胞核，是作為核因子發(fā)揮作用的。②從細胞形態(tài)學上和蛋白水平再次證明K R T l 8 ／L R P l 6 在活細胞內存在相互作用。③K R T l 8 可調控L R P l 6 的核漿穿梭，能夠將L R P l 6 亞細胞分布趨向細胞漿。④K R T l 8 可以將L R P l 6 扣留在細胞漿，是影響L R P l 6 亞細胞分布的關鍵因子