RILP通過與RaIGDS相互作用調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的遷移與侵襲.pdf

1、RILP（Rab7-interacting lysosomal protein）是小分子GTP酶Rab7和Rab34的下游效應(yīng)因子，其可以被活化形式的Rab7募集到晚期內(nèi)體和溶酶體膜上，并且RILP可以募集功能性的dynein-dynactin至晚期內(nèi)體和溶酶體，引起晚期內(nèi)體和溶酶體的聚集。
　　最近有研究報(bào)道，過表達(dá)RILP導(dǎo)致溶酶體在細(xì)胞核周圍定位，降低了前列腺癌細(xì)胞的侵襲，但機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。
　　本文通過研究RI

2、LP對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲的影響，深入探討RILP對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移、侵襲的調(diào)控機(jī)制。本研究首先明確了過表達(dá)RILP會(huì)明顯抑制乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的增殖，遷移和侵襲，而沉默RILP的表達(dá)后則會(huì)增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞MCF7的增殖，遷移和侵襲。為了研究RILP對(duì)腫瘤細(xì)胞的調(diào)控機(jī)制，我們實(shí)驗(yàn)室此前用酵母雙雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)RILP會(huì)與Ral鳥苷酸交換因子(RalGDS)相互作用，而RalGDS蛋白是Ras下游的效應(yīng)因子。本研究進(jìn)一步用GST

3、-Pulldown、Co-IP技術(shù)驗(yàn)證了RILP與RalGDS的相互作用，并且該兩種蛋白相互作用的區(qū)域分別是RILP的N端(1-199)和RalGDS蛋白的GEF區(qū)域。細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示過表達(dá)RILP會(huì)募集RalGDS蛋白至晚期內(nèi)體/溶酶體。由于RalGDS是小G蛋白R(shí)al的GEF(guanine nucleotide exchange factor)，本研究進(jìn)一步探索了過表達(dá)RILP對(duì)RalGDS下游RalA活化的影響。研究結(jié)果表明

4、RILP通過與RalGDS蛋白相互作用從而抑制了RalGDS對(duì)RalA的激活(GTP-form)，同時(shí)還會(huì)抑制RalA下游效應(yīng)因子Sec5和Exo84與RalA激活形式之間的相互作用。本研究進(jìn)一步分析了過表達(dá)RILP不會(huì)影響RalA QL的活性。有趣的是，本研究還發(fā)現(xiàn)過表達(dá)RILP也會(huì)募集RalA至溶酶體。過表達(dá)RalA蛋白會(huì)使得腫瘤細(xì)胞增加侵略性，細(xì)胞形態(tài)偽足增多，然而同時(shí)過表達(dá)RILP和RalA蛋白后，腫瘤細(xì)胞的侵略性降低，細(xì)胞形態(tài)