m2型乙酰膽堿受體在豚鼠前庭毛細胞中的表達的實驗研究.pdf

1、目的：已有的研究已經(jīng)證實乙酰膽堿（acetylcholine，Ach）是哺乳動物主要的內(nèi)耳傳出神經(jīng)遞質(zhì)，在外周前庭系統(tǒng)中存在各種毒菌堿型乙酰膽堿受體（muscarinic acetylcholine receptor，mAChR）和煙堿型乙酰膽堿受體（nicotinic acetylcholine receptor，nAChR）。目前的研究表明m1-m5型乙酰膽堿受體在哺乳動物前庭終器中均有表達，但這些受體在前庭組織中的細胞定位國內(nèi)外尚

2、無報道，本實驗研究編碼m2型乙酰膽堿受體（m2 muscarinic acetylcholine receptor，m2 mAChR）的mRNA在豚鼠前庭終器及Ⅱ型前庭毛細胞（vestibular hair cell，VHC）中的表達。
　　 方法：1. 從豚鼠內(nèi)耳中分離出前庭組織并提取RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）法

3、檢測編碼m2 mAChR的mRNA是否在豚鼠前庭組織中有表達。2. 從豚鼠前庭組織中分離出Ⅱ型前庭毛細胞，在顯微操作儀器下應(yīng)用玻璃電極捕獲單個Ⅱ型前庭毛細胞，應(yīng)用單細胞RT-PCR（single cell reverse transcription polymerase chain reaction，SC-RT-PCR）法檢測編碼m2 mAChR的mRNA是否在豚鼠Ⅱ型前庭毛細胞中有表達，從而明確m2 mAChR在前庭組織中的細胞定位。

4、
　　 結(jié)果：在豚鼠前庭終器及Ⅱ型前庭毛細胞中均可檢測到編碼m2 mAChR基因的mRNA的表達，經(jīng)測序證實其與預(yù)計擴增的cDNA序列一致。
　　 結(jié)論：本研究運用RT-PCR的方法成功的檢測出編碼m2 mAChR基因的mRNA在豚鼠前庭終器中的表達，并進一步運用單細胞RT-PCR的方法檢測編碼m2 mAChR的mRNA在豚鼠VHCs Ⅱ中的表達，由此為m2 mAChR在豚鼠VHCs Ⅱ中的存在提供證據(jù)，并證實m2 mA