大鼠糖尿病早期近端腎小管葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2的表達(dá)增強(qiáng).pdf

1、目的：觀察大鼠糖尿病（Diabetes Mellitus，DM）早期近端小管葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2（Facilitated Glucose Protein2，GLUT2）表達(dá)的變化，探討GLUT2與糖尿病腎病（Diabetic Nephropathy， DN）的關(guān)系。 方法：健康雄性SD大鼠被隨機(jī)分為正常對照組和糖尿病模型組，模型組以成年健康雄性SD大鼠在禁食12h后一次性腹腔注射STZ，48h后測血糖，以血糖值均≥16．7mmol/

2、L為造模成功；對照組注射同等體積的枸櫞酸緩沖液，置代謝籠內(nèi)監(jiān)測日飲水量、24h尿量變化；分別于STZ注射后正常喂養(yǎng)1周、2周、4周、6周，至造模成功后分別取兩腎，稱量兩腎的重量及大鼠體重，一腎用于HE染色觀察腎臟組織病理學(xué)變化、免疫組織化學(xué)過氧化物酶連接法測定腎內(nèi)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT2的定位和表達(dá)；另一腎迅速置液氮2～3min后，放入-80℃深低溫冰箱保存，用差速離心法制備腎小管刷狀緣膜（Brush-Border Membrane V

3、esicle，BBMV），BCA法測定蛋白濃度后行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）檢測，Western blot鑒定GLUT2蛋白并應(yīng)用圖象分析儀進(jìn)行GLUT2定量。并同時心臟取血測血糖、血胰島素以及其他指標(biāo)。 結(jié)果：1、DM大鼠模型成功建立：所有大鼠血糖均≥16．7mmol/L，與正常對照組相比，糖尿病模型組血糖值明顯增高（P<0．01），且大鼠出現(xiàn)三多癥狀（多食、多飲、多尿），精神萎靡、毛色晦暗、行動遲緩、體重

4、減輕或增長緩慢。試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與正常對照組相比，糖尿病模型組腎比重、尿蛋白、血肌酐均明顯增加（p<0．05）。2、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：GLUT2主要在近端腎小管表達(dá)，與正常對照組相比，糖尿病各模型組近端腎小管GLUT2蛋白表達(dá)顯著升高（p<0．01），灰度值評分降低（染色加深），其中各糖尿病模型組之間也有差異：與1周組、2周組的表達(dá)量相比，4周組顯著性增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0．05）；與4周組相比，6周組近端腎小管GLUT2

5、蛋白量顯著性降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0．05）。而與1周和2周組相比，6周組近端腎小管GLUT2蛋白量無明顯差異（p>0．05），但仍然高于正常對照組（p<0．05）。3、Western blot結(jié)果顯示：正常對照組GLUT2有微弱表達(dá)，與正常對照組相比，糖尿病模型組近端腎小管GLUT2蛋白表達(dá)顯著性增加（p<0．01），其中糖尿病模型組之間也有差異：自糖尿病模型1周組開始GLUT2蛋白在近端腎小管呈明顯陽性，表達(dá)開始升高，在糖尿病

6、4周組時近端腎小管GLUT2的表達(dá)達(dá)到峰值，而6周有下降趨勢；與1周組、2周組糖尿病大鼠近端腎小管GLUT2表達(dá)量相比，4周組糖尿病大鼠腎GLUT2表達(dá)量顯著性增加（p<0．05）；與4周組糖尿病大鼠腎GLUT2相比，6周組糖尿病大鼠近端腎小管GLUT2明顯降低（p<0．05），而與1周組、2周組相比6周組近端腎小管GLUT2的表達(dá)無顯著差異（p>0．05），但仍然明顯高于正常對照組近端腎小管GLUT2的表達(dá)（p<0．05）。4、大鼠糖

7、尿病早期近端腎小管GLUT2灰度值與血清胰島素含量成正相關(guān)（r=0．982，p<0．01）；與血糖值成負(fù)相關(guān)（r=-0．871，p<0．05）。 結(jié)論：1、大鼠1型糖尿病模型早期近端腎小管GLUT2蛋白的表達(dá)增高，糖尿病早期的發(fā)病過程包含了GLUT2表達(dá)的增強(qiáng)這一因素。2、大鼠糖尿病早期近端腎小管GLUT2蛋白的表達(dá)有時間依賴性，1周組時近端腎小管GLUT2蛋白在DM大鼠表達(dá)增高，至4周組時達(dá)高峰，而6周組稍有下降。3、大鼠糖尿