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1、目的:木糖醇因具有改善糖代謝、促進(jìn)胰島素分泌及抑制酮體生成等作用而廣泛用于糖尿病及暫不能進(jìn)食患者的腸外營養(yǎng)等方面的治療;我國于上世紀(jì)90年代中期始將木糖醇用于糖尿病食品甜味添加劑中。與其它甜味劑相比,木糖醇相對(duì)廉價(jià),制作工藝簡(jiǎn)單,甜度與蔗糖相當(dāng),作為糖尿病食品甜味添加劑仍不失為一種理想的選擇;而近年研究顯示:長(zhǎng)期輸注一定劑量、短期大劑量靜脈應(yīng)用木糖醇會(huì)因人體內(nèi)血尿酸水平升高而致腎損害,甚至有因急性腎衰致死的個(gè)案報(bào)道;而口服木糖醇是否可致
2、腎損害目前尚未見報(bào)道。本研究旨在觀察喂飼木糖醇是否可使糖尿病大鼠血液中尿酸、尿囊素水平升高致腎小管損害,并探討其機(jī)制,為木糖醇可否作為糖尿病患者食品甜味添加劑及/或添加比例提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 方法: 1.反相高效液相色譜法(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)同時(shí)檢測(cè)血清、尿液中尿酸、尿囊素和肌酐方法的建立:血清在檢測(cè)前需先用5%的高氯酸
3、溶液去蛋白,尿液標(biāo)本則要先稀釋和過濾。用國產(chǎn)C<,18>反相色譜柱為固定相,磷酸鹽緩沖液為流動(dòng)相,以峰面積進(jìn)行定量。 2.將100只雄性wistar大鼠分為五組:隨機(jī)選取16只為正常對(duì)照組(NC組),余84只造成糖尿病模型,取80只成模大鼠平均分為糖尿病對(duì)照組(DC組)、5%木糖醇組(D+5%Xy組)、10%木糖醇組(D+10%Xy組)和20%木糖醇組(D+20%Xy組)。糖尿病造模予鏈脲佐菌素(STZ)50mg/kg尾靜脈一次
4、性注射,72小時(shí)后測(cè)血糖≥16.7mol/L為造模成功。大鼠成模后,NC組、DC組喂養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)飼料,其余三組在標(biāo)準(zhǔn)飼料中分別加入低(5%)、中(10%)、高(20%)劑量的木糖醇連續(xù)喂養(yǎng)4周和8周。于4周、8周末各組大鼠分別留尿、采血,處死動(dòng)物各8只,摘取同側(cè)腎臟通過免疫組化方法和計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)觀察腎小管MCP和COX-2的表達(dá)。 結(jié)果: (1)RP-HPLC可同時(shí)檢測(cè)血清、尿液中的尿酸、尿囊素和肌酐,當(dāng)三者濃度在5~1
5、000μmol/L范圍內(nèi)時(shí)與峰面積具有良好的相關(guān)性,r=0.999,日內(nèi)和日間變異<7%,回收率在96.1%~102.9%之間。 (2)各組體重和血糖的變化:4、8周時(shí)糖尿病各組與同期NC組比較,體重均減輕(P<0.05),血糖升高(P<0.05);含木糖醇的糖尿病各組與同期DC組比較,體重均有所增加,血糖均有所下降,其中D+20%Xy組體重增加、血糖下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (3)腎重指數(shù)的變化:4、8周時(shí)糖
6、尿病各組較同期NC組升高(P<0.05);D+20%Xy組較同期DC組下降(P<0.05)。 (4)尿酸、尿囊素的變化:糖尿病各組血尿酸、尿囊素水平均較同期Nc組升高(P<0.05),尿尿酸、尿囊素水平較同期Nc組下降;D+5%Xy和D+10%Xy組血尿酸、尿囊素水平較同期DC組升高,尿尿酸、尿囊素水平較同期DC組下降;D+20%Xy組血尿酸、尿囊素水平較同期DC組下降(P<0.05),尿尿酸、尿囊素水平較同期DC組升高(P<0
7、.05)。 (5)肌酐、肌酐清除率的變化:4、8周時(shí)各組血肌酐、尿肌酐、肌酐清除率差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (6)各組尿酸清除分?jǐn)?shù)的比較:糖尿病各組均較同期NC組下降(P<0.05);D+5%Xy、D+10%Xy組較同期DC組下降(P<0.05);D+20%Xy組則較同期DC組升高。(7)各組腎小管MCP-1和COX-2的表達(dá):4、8周時(shí)糖尿病各組MCP-1和COX-2的表達(dá)均較同期NC組增強(qiáng)(P<0.05);D+5%Xy、D
8、+10%Xy組表達(dá)強(qiáng)于同期DC組(P<0.05);D+20%Xy組表達(dá)弱于同期DC組;糖尿病每組8周與4周比較,表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)。 結(jié)論: 1.RP-HPLC法同時(shí)檢測(cè)血清、尿液尿酸、尿囊素和肌酐,具有快速、需樣量小和靈敏度高的特點(diǎn),操作簡(jiǎn)便,穩(wěn)定性及重復(fù)性好,完全可運(yùn)用于科研和臨床的需要。 2.實(shí)驗(yàn)表明,木糖醇對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠具有降低血糖,增加體重的作用;糖尿病大鼠的病理生理變化致其血液中生成尿
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