乳源β-酪啡肽-7降血糖作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、近年來(lái)，高血糖對(duì)機(jī)體的危害問(wèn)題越來(lái)越引起人們的關(guān)注。高血糖發(fā)展到一定程度就稱為糖尿病(dibaetesmellitus， DM)。長(zhǎng)期以來(lái)糖尿病一直被認(rèn)為是一種嚴(yán)重危害健康的常見(jiàn)慢性終身疾病，而今已成為現(xiàn)代人類所面臨的一個(gè)主要健康問(wèn)題。乳中含有多種活性成分，有報(bào)道認(rèn)為其有降血糖作用，但作用的有效成分并不明確，本文以SD大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，研究主要的乳源活性肽β-酪啡肽7（β-casomorphin-7，β-CM7）對(duì)大鼠血糖水平的影響，探討

2、其可能的輔助降血糖作用及其機(jī)制。研究包括三個(gè)部分：
　　 試驗(yàn)一β-CM7輔助降血糖的作用及機(jī)制初探
　　 選用健康成年SD大鼠16只，隨機(jī)分成對(duì)照組和試驗(yàn)組，分別灌喂生理鹽水和β-CM7(7.5×10-6mol/L)。連續(xù)灌喂30天后，斷頸處死，取血清、肝臟及肌肉等進(jìn)行如下試驗(yàn)：1）氧化酶法測(cè)定血液中葡萄糖濃度；2）肝糖原、肌糖原含量的測(cè)定；3）血清中胰島素(insulin)、胰高血糖素（glucagon）水平的RIA

3、分析；4）小腸黏膜α-葡萄糖苷酶和Na+-K+-ATP酶活性分析；5）小腸黏膜組織中SGLT-1mRNA表達(dá)分析。試驗(yàn)結(jié)果顯示：連續(xù)灌喂β-CM7大鼠血糖濃度較灌喂生理鹽水有降低，但二者之間差異不顯著(p＝0.35)；肝糖原、胰島素、胰高血糖素、α-葡萄糖苷酶活力、Na+-K+-ATP酶活力二組之間均無(wú)明顯差異；試驗(yàn)組肌糖原含量低于對(duì)照組(p=0.001)：SGLT-1mRNA表達(dá)顯著低于對(duì)照組(p＝0.02)。結(jié)論：β-CM7具有輔助

4、降血糖作用，其機(jī)制可能是通過(guò)下調(diào)小腸黏膜上皮SGLT-1mRNA的表達(dá)，減少腸道葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)，并增加肌糖原的消耗。
　　 試驗(yàn)二β-CM7對(duì)大鼠腸道葡萄糖吸收的抑制及其機(jī)制
　　 利用翻轉(zhuǎn)的離體小腸模型研究了β-CM7對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)和小腸黏膜Na+-K+-ATP酶活力的影響，同時(shí)利用納洛酮(NaL)阻斷劑與β-CM7按2：1濃度混合，探討了影響葡萄糖吸收的阿片機(jī)制。結(jié)果顯示，在離體情況下β-CM7在7.5×10-7---7

5、.5×10-5mol/L濃度范圍內(nèi)對(duì)葡萄糖的吸收均有一定的抑制作用，抑制作用與其濃度呈正相關(guān)（與0mol/L對(duì)照組相比，7.5×10-7mol/Lβ-CM7組（L組）p=0.09;7.5×10-6mol/Lβ-CM7組（M組）p=0.04;7.5×10-smol/Lβ-CM7組（H組）p=0.01）；能夠降低葡萄糖跨膜快速轉(zhuǎn)運(yùn)期的平均速率(L組p=0.09;M組p=0.04;H組p=0.007)。能夠顯著降低Na+-K+-ATP酶活力，

6、與對(duì)照組相比，L組差異極顯著p=0.004; SGLT-1和GLUT-2Real-timePCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組相比，L組、M組SGLT-1(p=0.02,0.05)和L組GLUT-2(p=0.03)mRNA表達(dá)水平顯著下降。阿片特異性拮抗劑納洛酮對(duì)β-CM7的抑制作用沒(méi)有明顯的逆轉(zhuǎn)。結(jié)果認(rèn)為提示β-CM7可以通過(guò)非阿片樣途徑抑制小腸對(duì)葡萄糖的吸收，具有輔助降血糖作用，其機(jī)制可能是通過(guò)降低Na+-K+-ATP酶活力及下調(diào)SGLT-1、

7、GLUT-2mRNA的表達(dá)，從而減少了腸道葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)。
　　 試驗(yàn)三β-CM7降糖作用的細(xì)胞學(xué)驗(yàn)證
　　 試驗(yàn)一結(jié)果顯示：β-CM7能夠極顯著的降低大鼠肌糖原含量，對(duì)肝糖原含量無(wú)影響。在這個(gè)試驗(yàn)中，我們將通過(guò)體外培養(yǎng)C2C12細(xì)胞和LO2細(xì)胞，對(duì)調(diào)控糖代謝的靶細(xì)胞進(jìn)行篩選，同時(shí)觀察不同培養(yǎng)條件下β-CM7對(duì)C2C12細(xì)胞和LO2細(xì)胞葡萄糖消耗和細(xì)胞活力的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)β-CM7能明顯的促進(jìn)高糖狀態(tài)下C2C12細(xì)胞對(duì)