酶解酪蛋白產(chǎn)生酪啡肽的條件研究.pdf

1、酪蛋白是乳中含量最豐富的蛋白質(zhì)，含有人體生長(zhǎng)發(fā)育所必須的氨基酸。近年來(lái)的研究結(jié)果表明，酪蛋白除具有營(yíng)養(yǎng)功能之外，還具有非常重要的生理功能，是生物活性肽的重要來(lái)源。其中酪啡肽具有抑制腸道運(yùn)動(dòng)，免疫促進(jìn)，促進(jìn)胰島素的分泌等生理作用而備受關(guān)注。大量科學(xué)研究表明，通過(guò)選擇適當(dāng)?shù)牡鞍酌?，水解的蛋白質(zhì)可以得到大量的具有各種生物功能的生物活性肽。 研究了胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶對(duì)干酪素的水解，用甲醛固定法對(duì)蛋白質(zhì)的水解度進(jìn)行

2、測(cè)定，并用水解度(DH)表征其反應(yīng)歷程。分析了底物濃度([S])、酶濃度([E])及時(shí)間(t)等參數(shù)對(duì)DH、水解速度的影響。采用四因素三水平正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以DH為指標(biāo)，對(duì)蛋白酶水解酪蛋白的條件進(jìn)行優(yōu)化，以獲得幾種蛋白酶的最佳反應(yīng)條件。 胰蛋白酶水解酪蛋白，最佳水解條件為酶濃度0.15％、溫度55℃、PH7.5、底物濃度6％，水解30min其DH值為16.67％；木瓜蛋白酶水解酪蛋白，最佳水解條件為酶濃度0.8％、底物濃度2％、P

3、H6.0、溫度70℃，水解1小時(shí)其DH值為12.14％；中性蛋白酶水解酪蛋白，最佳水解條件為酶濃度0.6％、底物濃度2％、溫度55℃、pH=8.0。水解其DH值為10.05％。 利用SephadexG-15交聯(lián)葡聚糖凝膠柱(1.7cm×57.5cm)粗分離胰蛋白酶—胃蛋白酶、中性蛋白酶—胃蛋白酶、木瓜蛋白酶—胃蛋白酶組合酶的酪蛋白水解液，根據(jù)SephadexG-15分離蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程1gM=4.82216-2.81531K

4、av得到水解度與分子量的關(guān)系。 用RP—HPLC檢測(cè)β—酪啡肽—7，采用ODS柱(250mm×4.6mm，4.7μm)，以乙腈—水(20∶80)為流動(dòng)相。流速：1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)215nm，柱溫40℃，柱壓9.6MP進(jìn)行洗脫，得到標(biāo)準(zhǔn)品的比較理想的色譜圖譜，保留時(shí)間為29.912min。 用液相色譜對(duì)SephadexG-15分離的收集組分進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)胰酶—胃酶組合得到4種與標(biāo)準(zhǔn)品β—酪啡肽—7相同保留時(shí)間的色譜圖