miR-372對胃部細胞的影響及作用機制研究.pdf

1、胃癌是一種很常見的癌癥，在中國是死亡率較高的癌癥之一。在所有男性和女性惡性腫瘤中，胃癌發(fā)病率分別列第4、第5。我國每年約有30萬人死于胃癌，另有約40萬新發(fā)病例。盡管手術聯(lián)合放療等先進技術的應用于胃癌的治療，但是仍然沒有一種方法能徹底治療胃癌。這主要是由于沒有對胃癌的發(fā)病機制有一個很清楚的了解。
　　 近期研究發(fā)現(xiàn)多種miRNAs在胃癌表達異常并直接參與調(diào)控其發(fā)生和發(fā)展。例如:miR-106a在胃癌組織中的表達量明顯更高，并且與

2、胃癌的腫瘤大小、分期、腹腔和遠處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移直接相關，提示miR-106a可能具有促進胃癌進展的作用。Let-7 microRNA家族成員在胃癌組織呈低表達，其具有負調(diào)控HMGA2基因的作用，而高表達的HMGA2蛋白在胃癌組織，腫瘤更容易向漿膜外侵襲，患者預后更差。這些研究證據(jù)揭示了miRNAs可能通過各種不同的方式和途徑對胃癌的癌變過程起促進或者抑制作用，進而影響其生物學行為。本實驗中，通過對15對臨床胃腺癌標本的分析發(fā)現(xiàn)，miR-37

3、2在胃腺癌組織中的表達量普遍高于癌旁組織。在兩種胃癌細胞(AGS和HGC-27)和正常的人胃粘膜細胞(GES-1)分析發(fā)現(xiàn)，miR-372僅在AGS細胞系中高表達，這提示miR-372的表達可能與癌癥類型或起源有關。通過Hoechst33258染色方法和流式細胞分析細胞凋亡、Western blot檢測Caspase-8和PARP的表達等實驗發(fā)現(xiàn)抑制miR-372的表達可誘導AGS細胞凋亡，而在HGC-27細胞系中過表達miR-372發(fā)

4、現(xiàn)可以促進細胞增殖。通過熒光素酶活性以及突變分析實驗、Western blot實驗分別抑制或過表達AGS細胞和HGC-27細胞中的miR-372，從“正”和“反”兩方面實驗證明miR-372可以直接抑制TNFAIP1的表達并激活NFκB轉(zhuǎn)錄活性。TNFAIP1是受腫瘤發(fā)生的促炎癥因子腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素6(IL6)誘導的蛋白。在HeLa細胞中發(fā)現(xiàn)過表達TNFAIP1可以誘導細胞凋亡，大鼠的實驗中發(fā)現(xiàn)TNFAIP1能和PC

5、NA以及DNA聚合酶δ的小亞基P50相互作用，也可以在PCNA存在的條件下激活DNA聚合酶的活性，TNFAIP1蛋白也可能在TNFα信號通路以及DNA合成或者細胞凋亡中扮演了重要的角色。另一方面，運用真核表達質(zhì)粒pCMV-myc-TNFAIP1在胃癌細胞中過表達TNFAIP1能誘導胃癌細胞的凋亡，同時Caspase8和PARP也被激活，這些影響與在胃癌細胞中干擾miR-372所引起的效果一致。
　　 因此，我們的研究表明miR-