高賴氨酸蛋白基因sb401玉米轉基因植株的獲得及檢測分析.pdf

1、玉米是全世界最重要的糧食、飼料和經濟兼用作物,但是玉米中賴氨酸的含量偏低,每百克含賴氨酸僅2.5g左右,而賴氨酸是人和畜禽必須的營養(yǎng),這樣導致玉米中蛋白質的利用率很低。增加玉米中蛋白質和賴氨酸含量,促進人和動物對其蛋白質的消化吸收,將提高玉米的利用價值。
　　 傳統(tǒng)的育種方法在一定程度上提高了賴氨酸的含量,但是提高的潛力不大,費時費力?，F代分子生物學和生物技術的迅速發(fā)展為使用基因工程技術手段來實現玉米品質的改良帶來了希望。相對于

2、其它轉化方法來說,農桿菌介導法具有能夠轉移相對較大的DNA片段、外源基因單拷貝或低拷貝整合、不易引起分子間或分子內重排、轉化效率高等優(yōu)點,但是其轉化效率又受到受體材料、菌液濃度和培養(yǎng)基成分等多種因素的限制,因此建立一套完整的、高效的遺傳轉化體系是非常重要的。
　　 本研究利用農桿菌介導法將含有從馬鈴薯花粉中克隆出的高賴氨酸蛋白基因sb401和標記基因bar的植物表達載體轉到玉米雜交組合HiⅡA×B中。所用的農桿菌菌株為EHA10

3、5,轉化材料為由HiⅡA×B的幼胚誘導出的愈傷組織,利用優(yōu)化后的轉化系統(tǒng),確定農桿菌的懸浮濃度OD600為0.6～0.8,侵染時間為5min,侵染后的愈傷組織共培養(yǎng)時間為3～4d。第一輪篩選所用雙丙胺膦濃度為1.5mg/L,以后篩選濃度均為3m/L,共篩選3～4輪。經雙丙胺膦篩選后得到70株轉化植株,PCR檢測發(fā)現有15株呈剛性。隨機選取4株PCR呈陽性的植株進行PCR-southern檢測,雜交結果呈陽性,證明外源基因已經整合到玉米基