URG11的表達(dá)與胃癌惡性生物學(xué)行為的關(guān)系及其可能機(jī)制.pdf

1、本文研究目的：探討URG11在胃癌中的表達(dá)及意義；闡明URG11對(duì)胃癌惡性生物性行為的影響及相應(yīng)的調(diào)控機(jī)制。 研究方法：(1)免疫組化方法研究URG11在胃癌及癌旁組織的表達(dá)情況，并分析URG11與胃癌患者臨床病理資料之間的關(guān)系。(2)RT-PCR和Westernblot方法檢測胃癌細(xì)胞和永生化胃上皮細(xì)胞URG11mRNA和蛋白的表達(dá)。(3)構(gòu)建URG11-siRNA載體；將構(gòu)建的載體轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞MKN28，G418進(jìn)行轉(zhuǎn)染細(xì)胞

2、的穩(wěn)定篩選并克隆化，從蛋白水平鑒定轉(zhuǎn)染細(xì)胞。(4)用URG11-siRNA干預(yù)胃癌細(xì)胞的URG11的表達(dá)后，采用MTT法繪制轉(zhuǎn)染細(xì)胞的生長曲線；采用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測胃癌細(xì)胞的克隆形成能力；采用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測胃癌細(xì)胞周期的分布；裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)檢測體內(nèi)成瘤能力。(5)侵襲實(shí)驗(yàn)、黏附實(shí)驗(yàn)及損傷刮擦實(shí)驗(yàn)檢測URG11-siRNA載體及空載體轉(zhuǎn)染后胃癌細(xì)胞體外侵襲、黏附、移動(dòng)能力。(6)裸鼠肝轉(zhuǎn)移體內(nèi)實(shí)驗(yàn)檢測URG11-siRNA載體及空載體

3、轉(zhuǎn)染后胃癌細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力。(7)Fluo-3/AM染色，激光共聚焦顯微鏡觀察URG11-siRNA載體轉(zhuǎn)染及空載體后胃癌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。 研究結(jié)果：(1)與正常胃粘膜上皮細(xì)胞相比，URG11在胃癌組織中高表達(dá)，并且和胃癌的分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P＜0.001)。(2)URG11mRNA和蛋白在所檢測的五種胃癌細(xì)胞系中均有表達(dá)，而在永生化的胃上皮細(xì)胞中無表達(dá)。(3)URG11-siRNA可抑制胃癌細(xì)胞的增

4、殖，降低胃癌細(xì)胞的克隆形成能力(P＜0.05)，阻滯胃癌細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期。URG11-siRNA轉(zhuǎn)染的胃癌細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力較對(duì)照組的胃癌細(xì)胞降低(P＜0.05)。(4)URG11-siRNA可抑制胃癌細(xì)胞體外的遷移、侵襲和黏附能力(P＜0.05)。(5)URG11-siRNA轉(zhuǎn)染的胃癌細(xì)胞裸鼠肝轉(zhuǎn)移能力下降(P＜0.05)。(6)URG11-siRNA降低胃癌細(xì)胞胞漿內(nèi)鈣離子的濃度。 研究結(jié)論：(1)URG11的表達(dá)與胃癌的