ALOX5AP基因和IL-1A基因多態(tài)性與缺血性卒中的相關(guān)性.pdf

1、研究背景： 腦血管病是嚴(yán)重危害人類健康的常見病、多發(fā)病，是人類三大死亡原因之一；缺血性卒中(IS)的發(fā)病率占腦血管疾病發(fā)病率的80％。雖然其確切遺傳機(jī)制尚不清楚，但近些年人們通過多態(tài)性關(guān)聯(lián)分析等方法已經(jīng)報(bào)告了一些與IS有關(guān)的新易感性基因，如ApoE、PDE4D、ALOX5AP、IL-1A等基因。但是針對(duì)這些候選基因在不同地區(qū)、針對(duì)不同種族的關(guān)聯(lián)性研究結(jié)果均未得到有效的重復(fù)和肯定。我國北方地區(qū)為IS的高發(fā)區(qū)，有必要進(jìn)行一項(xiàng)針對(duì)我國

2、北方地區(qū)漢族人群IS易感基因的病例對(duì)照研究。 動(dòng)脈粥樣硬化的形成和發(fā)展是IS的重要病理生理基礎(chǔ)，而炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化的形成過程中具有重要的意義。因此本研究選取ALOX5AP基因和IL-1A基因這兩個(gè)炎癥相關(guān)基因，采用候選基因病例對(duì)照的研究方法，分析了由DECODE研究組命名的單倍型HapA的ALOX5AP基因四個(gè)位點(diǎn)(SG13S25A/G、SG13S32A/C、SG13S89A/G、SG13S114A/T)及IL-1A基因—

3、889位點(diǎn)的基因型、等位基因型在IS組、IS亞組及對(duì)照組中頻率分布差異，從而探討ALOX5AP基因、IL-1A基因多態(tài)性和中國北方漢族人群IS的相關(guān)性，為更詳盡的了解IS發(fā)病潛在的遺傳機(jī)制提供分子流行病學(xué)依據(jù)，并為早期診斷IS提供更多的分子生物學(xué)指標(biāo)。 研究方法： 采用病例—對(duì)照研究方法，IS組選取中國北方IS患者472例，男283例、女189例，年齡在40-80歲間，均為漢族，彼此無親緣關(guān)系；選取性別、年齡與IS組相匹

4、配的健康個(gè)體312例作為對(duì)照組，男183例、女129例；在此基礎(chǔ)上將IS組按病因不同分為大血管組(血栓性腦梗死組)和小血管組(腔隙性腦梗死組)。應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)—限制性片段長度多態(tài)性(PCR—RFLP)的方法檢測(cè)ALOX5AP基因SG13S32位點(diǎn)、SG13S89位點(diǎn)和IL-1A—889位點(diǎn)的多態(tài)性，應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜法(MALDI-TOF)檢測(cè)SG13S114位點(diǎn)、SG13S25位點(diǎn)多態(tài)性；基因分型結(jié)果經(jīng)雙脫氧末

5、端終止測(cè)序法進(jìn)一步確認(rèn)。用擬合優(yōu)度X2檢驗(yàn)驗(yàn)證每個(gè)位點(diǎn)SNP基因型在抽樣群體中的分布是否符合Hardy—Weinberg平衡。對(duì)于單位點(diǎn)的SNP數(shù)據(jù)，采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件X2 Fisher's精確概率法檢驗(yàn)其基因型、等位基因型在對(duì)照組與IS組及各亞組中的頻率分布差異、風(fēng)險(xiǎn)度分析，最后結(jié)合臨床資料，對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行條件Logistic回歸方法排除傳統(tǒng)混雜因素的干擾，以P<0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。用Shesis在線軟件計(jì)算ALOX5AP基

6、因單倍型的頻率。用UNPHASED軟件分析ALOX5AP基因與IL-1A基因?qū)S的聯(lián)合作用。 研究結(jié)果： 1、所有研究對(duì)象的每個(gè)SNP基因型在抽樣群體中的分布均符合Hardy—Weinberg平衡(P>0.05)，表示所選取的樣本具有人群代表性適合做遺傳學(xué)分析。 2、ALOX5AP基因多態(tài)性在對(duì)照組與IS組及IS亞組中頻率分布： SG13S32位點(diǎn)C等位基因頻率IS組明顯高于對(duì)照組(OR=1.271；95％CI

7、：1.027—1.572；P=0.028)；SG13S114位點(diǎn)AA基因型頻率大血管組明顯高于對(duì)照組(OR=1.987；95％CI：1.138—3.471；P=0.014)，應(yīng)用條件Logistic回歸校正后仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(OR=1.479；95％CI：1.024—2.135；P=0.037)。 3、ALOX5AP基因單倍型在對(duì)照組與IS組及IS亞組中頻率分布：HapA單倍型頻率分布在對(duì)照組、IS組及IS亞組中沒有差異；GCGA

8、單倍型的頻率IS組明顯高于對(duì)照組(OR=1.683；95％CI：1.138—2.487；P=0.008)，大血管組也高于對(duì)照組(OR=1.629；95％CI：1.047—2.532；P=0.029)，小血管組與對(duì)照組差別更加明顯(OR=1.806；95％CI：1.156—2.822；P=0.009)；GAGA單倍型的頻率IS組低于對(duì)照組(OR=0.763；95％CI：0.583-0.988；P=0.048)，大血管組的頻率也低于對(duì)照組(

9、OR=0.719；95％CI：0.522-0.99；P=0.042)。 4、不同性別的ALOX5AP基因單倍型的頻率分布差異：所有單倍型在男、女性IS組與對(duì)照組中的頻率分布未見到顯著性差異。 5、IL-1A基因多態(tài)性在對(duì)照組與IS組及IS亞組中頻率分布：L-1A—889 TT基因型頻率大血管組明顯高于對(duì)照組(OR=2.473；95％CI：1.129—5.42；P=0.02)，應(yīng)用Logistic校正后仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR

10、=1.581；95％CI：1.003—2.493；P=0.047)；其等位基因T的頻率大血管組也高于對(duì)照組(OR=1.540；95％CI：1.075—2.204；P=0.018)。IL-1A—889基因多態(tài)性在男、女性別中分布無差異。 6、ALOX5AP基因與IL-1A基因的聯(lián)合作用：同時(shí)攜帶ALOX5AP基因GCGA單倍型和IL-1A—889位點(diǎn)T等位基因的頻率IS組高于對(duì)照組(OR=1.608；95％CI：1.067—2.4

11、23；P=0.022)。 結(jié)論： 1、ALOX5AP基因SG13S114位點(diǎn)AA基因型可能是中國北方漢族人群血栓性腦梗死的獨(dú)立的風(fēng)險(xiǎn)因素，其風(fēng)險(xiǎn)性主要來源于A等位基因。 2、SG13S32位點(diǎn)C等位基因可以增加患血栓性腦梗死的遺傳易感性。 3、ALOX5AP基因HapA單倍型與IS沒有相關(guān)性。 4、ALOX5AP基因GCGA單倍型可能是IS的風(fēng)險(xiǎn)單倍型，GAGA可能是IS的保護(hù)性單倍型。