兩種與水稻OsRacD互作的肌球蛋白重鏈編碼基因的特征分析.pdf

1、OsRacD是水稻Rho家族的一個新成員，已有的研究結(jié)果顯示，功能之一是調(diào)控花粉管的延伸生長，是光敏核不育水稻農(nóng)墾58S光周期育性轉(zhuǎn)換相關(guān)信號通路中的一個重要基因。為進一步研究OsRacD相關(guān)信號通路及互作蛋白，梁衛(wèi)紅等以O(shè)sRacD為誘餌，采用酵母雙雜交體系從水稻幼穗中篩選到若干互作蛋白編碼基因的cDNA序列。本文對其中兩種新的水稻肌球蛋白重鏈基因OsMY1(NO：DQ641916)和OsMY2(NO：DQ641917)進行了研究。

2、 利用網(wǎng)絡(luò)工具和生物軟件對OsMY1、OsMY2核苷酸序列及其編碼蛋白進行了預(yù)測和分析，結(jié)果顯示二者核苷酸同源性為85％，都具有卷曲螺旋區(qū)及多種蛋白修飾位點，屬于水稻肌球蛋白重鏈XI。兩個基因均位于水稻的1號染色體上，推測OsMY2全長10566 bp，包括9個內(nèi)含子和10個外顯子，編碼947個氨基酸，具有一個Smc結(jié)構(gòu)域。分別構(gòu)建了兩種基因的原核表達載體pGEX-4T1/OsMY1和pGEX-4T1/OsMY2，進行了原核表達和

3、純化。檢測結(jié)果顯示帶有GST標簽的OsMY1和OsMY2主要以可溶形式存在于細菌裂解液上清中，約占細菌總蛋白質(zhì)量的40％以上，以抗GST標簽的抗體進行Western blot檢測，證實了融合蛋白表達和純化的正確性。以組成型表達的水稻肌動蛋白基因OsAct1為內(nèi)參，運用半定量RT-PCR技術(shù)分析OsMY1和OsMY2在時空表達特性，結(jié)果顯示二者在水稻不同時期不同組織中都有表達，但是表達量有變化，且具有不同的表達特性。隨著生長期的延長，Os

4、MY1在葉的表達活性稍有增加，而在根部的表達活性先是稍有增加后又稍有下降，在同一個生長期內(nèi)在綠葉中的表達活性相對于在黃化葉和根部中稍有增加；而OsMY2無論是在地上部分還是在根部，表達活性都是先增加后降低，在同一個時期該基因在根部表達活性明顯高于在綠苗和黃化苗中的表達量。 本研究為進一步確定OsMY1、OsMY2的功能，以及與OsRacD蛋白的互作關(guān)系、功能聯(lián)系奠定了基礎(chǔ)，有助于從信號通路中蛋白互作的角度探索和解析水稻光周期育性