無水酒精聯(lián)合砷劑瘤內(nèi)注射治療小鼠肝癌H22移植瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景:肝細(xì)胞癌(hepatocellular caicinoma,HCC)是最常見的惡性腫瘤之一。八十年代以來，對(duì)肝癌的研究取得了世人矚目的成就，基礎(chǔ)研究由整體和細(xì)胞水平進(jìn)入到分子水平，亞臨床肝癌的發(fā)現(xiàn)與手術(shù)切除，大幅度提高了肝癌的療效。但由于腫瘤晚期、多中心疾病、肝功能儲(chǔ)備差等原因，致使僅有少數(shù)患者適合手術(shù)切除，尋找新的治療藥物和治療手段具有重要意義。介入治療以其微創(chuàng)及可重復(fù)治療的優(yōu)點(diǎn)越來越受到人們重視，其中瘤內(nèi)注射療法以其經(jīng)濟(jì)、

2、簡便的優(yōu)點(diǎn)具有較大的優(yōu)勢。 瘤內(nèi)注射療法中以經(jīng)皮無水酒精注射療法(percutaneous ethanol injection therapy，PEIT)最具代表性，它已成為肝癌治療的有效手段且占有重要地位。無水酒精肝癌內(nèi)注射使肝癌細(xì)胞脫水固定，蛋白質(zhì)凝固變性，破壞腫瘤細(xì)胞，同時(shí)，腫瘤組織中的血管壁細(xì)胞變性、壞死、繼而血栓形成，導(dǎo)致腫瘤缺血壞死。隨后又相繼成功開發(fā)了經(jīng)皮瘤內(nèi)醋酸注射、高溫蒸餾水注射等瘤內(nèi)注射療法。 中藥砷

3、劑主要指砒霜和雄黃，前者主要成分是三氧化二砷(As2O3)，后者主要成分為硫化砷(As2S2)。上世紀(jì)中后期，我國學(xué)者使用As2O3治療急性早幼粒細(xì)胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)取得顯著療效。在此基礎(chǔ)上，國內(nèi)學(xué)者進(jìn)一步擴(kuò)大三氧化二砷研究及應(yīng)用范圍，發(fā)現(xiàn)它除對(duì)APL有突出療效外，對(duì)實(shí)體瘤細(xì)胞如胃癌、肺癌、乳腺癌、肝癌等也顯示良好的治療效果。體外實(shí)。驗(yàn)和動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究證明As2O3可以抑制多種

4、肝癌細(xì)胞系的生長，能夠抑制肝癌細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。As2O3用于臨床肝癌治療也取得了一定的療效。體外實(shí)驗(yàn)研究證明As2S2可以抑制肝癌細(xì)胞系的生長。As2S2不同于As2O3的是它的溶解度差，但它的毒性比As2O3小。有研究表明As2S2通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和提高NK細(xì)胞活性對(duì)小鼠肝癌H22移植瘤發(fā)揮抗腫瘤作用。目前，由于As2S2水溶性差，臨床上只限于口服給藥和外用，不能靜脈給藥。 砷劑可抑制肝癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡，發(fā)揮抗

5、癌作用，因此可以設(shè)想砷劑瘤內(nèi)注射可發(fā)揮其滅瘤效果，且毒副作用小較全身用藥小，無水酒精和砷劑聯(lián)合瘤內(nèi)注射可發(fā)揮協(xié)同作用殺滅肝癌細(xì)胞，提高單純無水酒精瘤內(nèi)注射滅瘤效果。 研究目的:本研究的目的旨在探討無水酒精聯(lián)合砷劑瘤內(nèi)注射療法在肝癌治療中的應(yīng)用價(jià)值，嘗試為肝癌治療提供一種新的可供選擇的治療手段。為此，本研究通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)建立昆明小鼠腋部皮下肝癌移植瘤模型，評(píng)估無水酒精聯(lián)合砷劑瘤內(nèi)注射治療肝癌的滅瘤效果及其可能的毒副反應(yīng)，為臨床應(yīng)用奠

6、定基礎(chǔ)?！　》椒ǎ簭?fù)制100只小鼠H22肝癌實(shí)體瘤模型，接種14天后，用游標(biāo)卡尺測量小鼠瘤徑，選取瘤長徑約1.0-1.2cm，短徑約0.8-1.0cm的小鼠80只，隨機(jī)80只小鼠分為四組(每組20只)：A生理鹽水組、B無水酒精組、C酒精雄黃組、D酒精亞砷酸組，各組小鼠腫瘤內(nèi)分別注射生理鹽水、無水酒精、無水酒精雄黃混懸液、無水酒精亞砷酸溶液，注射量為0.2ml，其中C組每只小鼠雄黃用量為1.5mg，D組每只小鼠亞砷酸用量為40μg(約1

7、.5μg/g)，共注射兩周，每周兩次。觀察腫瘤生長率、各組瘤重及抑瘤率、小鼠生存時(shí)間、肝腎功能變化。 結(jié)果:1.腫瘤生長率：各組治療后腫瘤體積均增大，有顯著性差異。B、C、D組腫瘤生長率均低于A組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；C組的腫瘤生長率低于B組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；D組的腫瘤生長率低于B組(P<0.01)和C組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.各組瘤重及抑瘤率：B、C、D組瘤重均低于A組，有統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。C組的瘤重低于B組，但兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；D組瘤重低于B組(P<0.01)和C組(P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C組對(duì)A組及B組的相對(duì)抑瘤率分別為52.30％和24.14％，D組對(duì)A組及B組的相對(duì)抑瘤率分別為72.90％和56.90％。 3.肝腎功能檢測：各組治療前后ALT、AST、BUN、Cr變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，Repeated Measures分析顯示不同藥物注射對(duì)A

9、LT、AST、BUN、Cr變化的影響無顯著性差異(組間兩兩比較均P>0.05)。 4.生存時(shí)間：B、C、D組存活時(shí)間均大于A組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，C組和D組存活時(shí)間均大于B組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05、P<0.01)；D組和C組存活時(shí)間無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)通過復(fù)制小鼠移植性肝癌模型，研究了無水酒精聯(lián)合砷劑瘤內(nèi)注射的療效。結(jié)果表明無水酒精聯(lián)合亞砷酸瘤內(nèi)注射療效優(yōu)于單純的無水酒精瘤內(nèi)注射

10、，可顯著延長生存時(shí)間，且無明顯的肝腎功能損害；無水酒精雄黃聯(lián)合瘤內(nèi)注射相對(duì)單純無水酒精注射未表現(xiàn)出明顯優(yōu)勢，但可延長小鼠生存時(shí)間?？赡軝C(jī)制：無水酒精肝癌內(nèi)注射使肝癌細(xì)胞脫水固定，蛋白質(zhì)凝固變性，破壞腫瘤細(xì)胞，同時(shí)，腫瘤組織中的血管壁細(xì)胞變性、壞死、繼而血栓形成，可減少對(duì)As2O3的血流沖刷，局部較高濃度As2O3旁滲可對(duì)周邊瘤體起抑殺作用，As2O3可通過抑制肝癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡，抑制端粒酶活性，抗肝癌血管生成，調(diào)節(jié)免疫功能發(fā)