三氧化二砷聯(lián)合5-FU對(duì)小鼠肝癌H-,22-細(xì)胞株及移植瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討三氧化二砷(AS2O3)聯(lián)合5-氟尿嘧啶(5-FU)對(duì)小鼠肝癌H22細(xì)胞株抑制作用及皮下移植瘤的影響作用，為提高治療肝癌的臨床效果、降低毒性和克服耐藥提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 實(shí)驗(yàn)Ⅰ：體外AS2O3聯(lián)合5-FU對(duì)小鼠肝癌H22細(xì)胞株增殖、細(xì)胞凋亡的影響： 1.MTT法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞生長的影響分別以不同濃度的AS2O3(終濃度為0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL)、5-FU(終濃度為

2、20mg/L)和以上各濃度AS2O3聯(lián)合5-FU體外作用于小鼠肝癌H22細(xì)胞24h、48h、72h后，觀察其對(duì)小鼠肝癌H22細(xì)胞增殖的影響，并計(jì)算細(xì)胞生長抑制率和兩藥物相互作用系數(shù)(CDI)： 2.TUNEL熒光染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況單用AS2O3或5-FU，或不同濃度AS2O3(0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL)聯(lián)合5-FU(20mg/L)作用于小鼠肝癌H22細(xì)胞24h、48h、72h后，熒光顯微鏡下觀察各

3、組細(xì)胞凋亡的情況并計(jì)算凋亡率； 實(shí)驗(yàn)Ⅱ：體內(nèi)AS2O3聯(lián)合5-FU治療小鼠肝癌皮下移植瘤的初步研究： 1.成功建立昆明小鼠肝癌皮下移植瘤動(dòng)物模型40只。按瘤體體積均衡的分為4組進(jìn)行藥物干預(yù)，依次為對(duì)照組(NS)、AS2O3組(AS2O30.2mg/kg)，5-FU組(10mg/kg)，AS2O3(0.2mg/kg)+5-FU(10mg/kg)組，每組10只，連續(xù)腹腔注射藥物2周，停藥后第二天處死動(dòng)物，留取血液標(biāo)本，解剖提

4、取腫瘤標(biāo)本。 2.分別測(cè)定比較各組小鼠腫瘤體積、HE染色觀察腫瘤組織病理變化、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)測(cè)定和采用原位末端標(biāo)記法(TUNEL法)觀察腫瘤細(xì)胞凋亡情況、計(jì)算凋亡率，小鼠肝腎功能相關(guān)生化指標(biāo)檢測(cè)。 結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)Ⅰ：體外AS2O3或5-FU單藥對(duì)小鼠肝癌H22細(xì)胞有顯著抑制增殖及誘導(dǎo)凋亡的作用，并呈一定的時(shí)間、濃度相關(guān)性。AS2O3聯(lián)合5-FU后，對(duì)小鼠肝癌H22細(xì)胞的抑制增殖及誘導(dǎo)凋亡作用較同時(shí)間內(nèi)相

5、應(yīng)單藥組效果明顯提高。計(jì)算兩藥相互作用系數(shù)(coefficientofdrugininteraction，CDI)值，各濃度AS2O3與5-Fu聯(lián)合作用H22細(xì)胞24h和48h時(shí)，均為CDI＜1，作用72h時(shí)，均為CDI=1，說明兩者在48h內(nèi)具有協(xié)同作用，72h時(shí)為相加作用。 實(shí)驗(yàn)Ⅱ：各組腫瘤體積有明顯差異(F=252.7，P＜0.01)，各藥物干預(yù)組平均腫瘤體積均明顯低于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，同時(shí)AS2O3+

6、5-FU組平均腫瘤體積顯著低于單用AS2O3和5-FU組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，單用或聯(lián)合AS2O3和5-FU后腫瘤體積縮小率分別為32.93％，64.56％和77.06％。AS2O3組細(xì)胞增殖指數(shù)顯著低于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，AS2O3+5-FU組細(xì)胞增殖指數(shù)顯著低于對(duì)照組和AS2O3組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，雖低于5-FU組，但無顯著差異(P＞0.05)；AS2O3組細(xì)胞凋亡率高于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、(P＜0.05)，AS2O3+5-FU組細(xì)胞凋亡率顯著高于AS2O3組和5-FU組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，血清ALT、AST、Cr檢測(cè)值治療組均較對(duì)照組高，但無顯著差異(P＞0.05)。 結(jié)論： 1.體外AS2O3和5-FU對(duì)小鼠肝癌H22細(xì)胞有明顯地抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡作用，并且呈時(shí)間和劑量相關(guān)性；聯(lián)合應(yīng)用后較相應(yīng)單藥組效果明顯增強(qiáng)，在48h內(nèi)兩者具有協(xié)同作用，72h時(shí)兩者作用相加。 2.體內(nèi)AS2O3和