女性系統(tǒng)紅斑狼瘡若干基因的相關(guān)性研究.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus,SLE)是一慢性非傳染性自身免疫疾病,遺傳和環(huán)境因素在SLE的發(fā)病過(guò)程中均起重要作用。本研究采用病例對(duì)照研究、單純病例研究及家系相關(guān)性研究設(shè)計(jì),應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction,PCR)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RestrictionFragmentLengthPolymorphism,RFLP)等分子生物學(xué)技術(shù),對(duì)中國(guó)長(zhǎng)江以南漢族女性

2、人群細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(cytotoxicTlymphocyte-associatedantigen4,CTLA-4)、程序性細(xì)胞凋亡1(programmedcelldeath-1,PDCD1)、甲基化CpG結(jié)合蛋白2(Methyl-CpG-bindingprotein2,MECP2)基因的多態(tài)性,以及CTLA-4、PDCD1基因多態(tài)與環(huán)境因素的交互作用與SLE的相關(guān)性進(jìn)行探索性研究。結(jié)果如下:
　　一、系統(tǒng)性紅斑狼瘡C

3、TLA-4、PDCD1基因多態(tài)與環(huán)境因素及其交互作用的研究
　　(一)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡CTLA-4、PDCD1基因多態(tài)性研究
　　1.病例組與對(duì)照組CTLA-4基因啟動(dòng)子區(qū)-318位點(diǎn)基因型分布與等位基因頻率差異均不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=2.248,P=0.325;X2=0.80,P=0.370)。
　　2.病例組與對(duì)照組CTLA-4基因啟動(dòng)子區(qū)-1722位點(diǎn)基因型分布不同,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=9.300,P=0

4、.010),以CC基因型為參照,攜帶TC基因型者,其SLE患病風(fēng)險(xiǎn)升高(OR=2.004,95％CI∶1.013-3.968),攜帶TT基因型者,其SLE患病風(fēng)險(xiǎn)也升高(oR=2.953,95％CI∶1.451-6.010);病例組T等位基因頻率高于對(duì)照(X2=9.110,P=0.003),提示T等位基因可能增加SLE的易感性(OR=1.664,95％CI∶1.194-2.318)。
　　3.病例組與對(duì)照組PDCD1基因PD1.2

5、位點(diǎn)基因型分布不同,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=20.596,P＜0.001),以AA基因型為參照,攜帶AG基因型的個(gè)體,其SLE患病風(fēng)險(xiǎn)升高(OR=2.917,95％CI∶1.780-4.780),攜帶GG基因型的個(gè)體,其SLE患病風(fēng)險(xiǎn)也升高(OR=3.111,95％CI∶1.284-7.537);病例組G等位基因頻率高于對(duì)照(X2=17.000,P＜0.001),提示G等位基因可能增加SLE的易感性(OR=2.121,95％CI∶1.

6、479-3.042)。
　　4.病例組與對(duì)照組PDCD1基因PD1.5位點(diǎn)基因型分布不同,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=7.235,P=0.027),以CC基因型為參照,攜帶TC基因型者,其SLE患病風(fēng)險(xiǎn)升高(OR=1.681,95％CI∶1.039-2.718);病例組T等位基因頻率高于對(duì)照(X2=6.020,P=0.014),提示T等位基因可能增加SLE的易感性(OR=1.661,95％CI∶1.105-2.496)。
　　

7、5.病例組與對(duì)照組PDCD1基因PD1.6位點(diǎn)基因型頻率分布不同,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=7.658,P=0.022),以AA基因型為參照,攜帶AG基因型的個(gè)體,其SLE患病風(fēng)險(xiǎn)升高(OR=1.756,95％CI∶1.085-2.841);病例組G等位基因頻率高于對(duì)照(X2=7.070,P=0.008),提示G等位基因可能增加SLE的易感性(OR=1.698,95％CI∶1.147-2.514)。
　　6.連鎖不平衡檢驗(yàn)顯示,病

8、例和對(duì)照人群CTLA-4基因-1722位點(diǎn)與-318位點(diǎn)等位基因之間未見連鎖不平衡(D'=0.363,P＞0.05);PDCD1基因PD1.2與PD1.5位點(diǎn)及PD1.2與PD1.6位點(diǎn)等位基因兩兩之間呈不完全連鎖不平衡(D'=0.195,P＜0.05:D'=0.035,P＜0.05)。
　　7.單倍型在病例與對(duì)照組的分布分析結(jié)果提示,由PD1.2G/A、PD1.5C/T、PD1.6G/A等位基因組成的A-C-A、G-T-A及G-

9、C-G單倍型均與SLE有關(guān),其他單倍型未發(fā)現(xiàn)顯著性。在相加遺傳模型中,G-T-A與G-C-G單倍型均與SLE相關(guān)(β=1.6619,Z=3.4976,P=0.0005,OR=5.2693;β=1.5567,Z=2.8338,P=0.0046,OR=4.7431),提示以不具有某種單倍型為參照,攜帶G-T-A和G-C-G單倍型的個(gè)體,其SLE患病風(fēng)險(xiǎn)均升高:在顯性模型中,G-T-A與G-C-G單倍型也均與SLE相關(guān)(β=1.5799,Z=

10、3.9499,P=0.0001,OR=4.8545;β=1.5722,Z=3.5024,P=0.0005,OR=4.8172),提示以不具有某種單倍型為參照,攜帶G-T-A和G-C-G單倍型的個(gè)體,其SLE患病風(fēng)險(xiǎn)升高;在隱性遺傳模型中,A-C-A單倍型與SLE呈負(fù)相關(guān)(β=-0.8062,Z=-3.0525,P=0.0023,OR=0.4466),提示以不具有A-C-A單倍型為參照,攜帶A-C-A單倍型的個(gè)體,其SLE患病風(fēng)險(xiǎn)明顯降低

11、。且上述三個(gè)遺傳模型中以相加模型最優(yōu)(AIC值最小)。
　　(二)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡基因多態(tài)與環(huán)境危險(xiǎn)因素的多因素分析
　　1.多因素非條件Logistic回歸分析表明,在遺傳因素方面,在相加遺傳模型中,CTLA-4基因-1722位點(diǎn)TT基因型(以CC基因型為參照)以及PD1.6位點(diǎn)AG基因型(以AA基因型為參照)均與SLE易感性有關(guān):在顯性遺傳模型中,僅PD1.6位點(diǎn)AG或GG基因型(以AA基因型為參照)與SLE易感性有關(guān):

12、在隱性遺傳模型中,僅CTLA-4基因-1722位點(diǎn)TT基因型(以CC基因型為參照)與SLE易感性有關(guān)。而在環(huán)境因素方面,凍瘡史、居住環(huán)境潮濕史、光敏感史、紫外線暴露史、麻疹史及有害物質(zhì)接觸史在上述3種遺傳模型中均為SLE的危險(xiǎn)因素。且上述3個(gè)模型中以相加模型最優(yōu)(AIC最小)。
　　2.多因素非條件Logistic回歸分析表明,在遺傳因素方面,在相加遺傳模型中,以不具有某種單倍型為參照,PDCD1基因的G-T-A與G-C-G單倍型

13、均與SLE易感性有關(guān);在顯性遺傳模型中,以不具有某種單倍型為參照,PDCD1基因G-T-A與G-C-G單倍型也均與SLE易感性有關(guān);在隱性遺傳模型中,以不具有某種單倍型為參照,PDCDI基因A-C-A單倍型與SLE呈負(fù)相關(guān),提示A-C-A可能為SLE的保護(hù)單倍型;A-T-G單倍型與SLE的相關(guān)性在3個(gè)模型中均無(wú)顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而在環(huán)境因素方面,凍瘡史、居住環(huán)境潮濕史、光敏感史、紫外線暴露史、麻疹史及有害物質(zhì)接觸史在上述3種遺傳模型下均

14、為SLE的危險(xiǎn)因素。且上述3種模型種以相加模型最優(yōu)(AIC值最小)。
　　(三)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡基因多態(tài)與環(huán)境危險(xiǎn)因素的交互作用研究
　　1.對(duì)數(shù)線性模型分析結(jié)果顯示,細(xì)胞凋亡生物學(xué)通路上可能存在凋亡相關(guān)基因與環(huán)境危險(xiǎn)因素的交互作用,而未發(fā)現(xiàn)凋亡基因間及環(huán)境危險(xiǎn)因素間的交互作用。在由CTLA-4基因-1722位點(diǎn)、PDCD1基因PD1.6位點(diǎn)、紫外線暴露史及年齡構(gòu)建的模型中,按最優(yōu)模型進(jìn)行參數(shù)估計(jì),在相加遺傳模型中,CTLA

15、-4-1722位點(diǎn)TT基因型與紫外線暴露史存在交互作用,OR值為4.744(95％CI:1.037-21.737):且TC基因型與紫外線暴露史也存在交互作用,OR值為4.973(95％CI∶1.110-22.287);在PD1.6位點(diǎn),GG基因型與紫外線暴露史存在交互作用,OR值為3.199(95％CI∶1.023-10.004),而AG基因型未發(fā)現(xiàn)交互作用。在顯性遺傳模型中,CTLA-4-1722位點(diǎn)的TT或TC基因型與紫外線暴露史存

16、在交互作用,OR值為4.874(95％CI∶1.119-21.242);而在PD1.6位點(diǎn)基因型未發(fā)現(xiàn)交互作用。在隱性遺傳模型中,CTLA-4-1722位點(diǎn)基因型未發(fā)現(xiàn)交互作用;PD1.6位點(diǎn)GG基因型與紫外線暴露史間存在交互作用,OR值為3.714(95％CI:1.235-11.179)。
　　2.基因多態(tài)與環(huán)境危險(xiǎn)因素間交互作用的Logistic回歸分析表明,從基因型角度,僅在相加遺傳模型中,發(fā)現(xiàn)CTLA-4基因-1722位點(diǎn)

17、TT基因型與紫外線暴露史間存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)上的交互作用(β=3.250,P=0.041),其他遺傳模型中未發(fā)現(xiàn)具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的交互作用,其他基因多態(tài)與環(huán)境危險(xiǎn)因素間的交互作用也未見統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性;從單倍型角度,不同遺傳模型中的基因多態(tài)與環(huán)境危險(xiǎn)因素間的交互作用也未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性。
　　二、系統(tǒng)性紅斑狼瘡MECP2基因的多態(tài)性研究
　　(一)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡以人群為基礎(chǔ)的相關(guān)性研究
　　1.病例組與對(duì)照組M

18、ECP2基因rs2239464位點(diǎn)基因型分布不同,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=6.902,P=0.009),以AG和GG基因型為參照,攜帶AA基因型的個(gè)體,其患病風(fēng)險(xiǎn)升高(OR=2.378,95％CI∶1.246-4.537);病例組A等位基因頻率高于對(duì)照(X2=6.73,P=0.009),提示A等位基因可能增加SLE的易感性(OR=2.170,95％CI∶1.196-3.937)。
　　2.病例組與對(duì)照組MECP2基因rs2075

19、596位點(diǎn)基因型頻率分布不同,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=14.432,P＜0.001),以AG和GG基因型為參照,攜帶AA基因型的個(gè)體,其患病風(fēng)險(xiǎn)升高(OR=3.259,95％CI∶1.772-5.995);病例組A等位基因頻率高于對(duì)照(X2=14.16,P＜0.001),提示A等位基因可能增加SLE的易感性(OR=2.807,95％CI∶1.613-4.884)。
　　3.連鎖不平衡檢驗(yàn)顯示,病例和對(duì)照人群MECP2基因rs22

20、39464與rs2075596位點(diǎn)等位基因之間呈不完全連鎖不平衡(D'=0.19,P＜0.05)。
　　4.單倍型在病例與對(duì)照組的分布分析結(jié)果提示,由MECP2基因rs2239464A/G與rs2075596A/G等位基因組成的A-A及G-G單倍型與SLE有關(guān),其余單倍型未見統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性。在相加遺傳模型中,A-A為SLE的危險(xiǎn)性單倍型(β=1.0038,Z=2.7300,P=0.0063,OR=2.7286),提示以不具有A-

21、A單倍型為參照,攜帶A-A單倍型的個(gè)體,其SLE患病風(fēng)險(xiǎn)升高;在顯性遺傳模型下,G-G為SLE的保護(hù)性單倍型(β=-0.9080,Z=-2.4191,P=0.0156,OR=0.4033),提示以不具有G-G單倍型為參照,攜帶G-G單倍型的個(gè)體,其SLE患病風(fēng)險(xiǎn)降低;在隱性遺傳模型下,A-A為SLE的危險(xiǎn)性單倍型(p=1.0076,Z=3.5349,P=0.0004,OR=2.739),提示以不具有A-A單倍型為參照,攜帶A-A單倍型的

22、個(gè)體,其SLE患病風(fēng)險(xiǎn)升高。且上述模型中以相加遺傳模型最優(yōu)。
　　(二)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的家系相關(guān)性研究
　　1.MECP2基因傳遞不平衡檢驗(yàn)分析表明,在父母雙親至少一方為雜合子的家系中,rs2239464位點(diǎn)A等位基因由雜合子父母向SLE患病子女的傳遞未見顯著增加(X2=0.2,P＞0.05);單個(gè)位點(diǎn)家系關(guān)聯(lián)性檢驗(yàn)(family-basedassociationtest,FBAT)分析顯示,在相加模型及隱性遺傳模型中均提示

23、m2239464位點(diǎn)A等位基因與SLE易感性無(wú)關(guān)(Z=0.447,P=0.655;Z=0.447,P=0.655);
　　2.MECP2基因傳遞不平衡檢驗(yàn)分析表明,在父母雙親至少一方為雜合子的家系中,rs2075596位點(diǎn)A等位基因由雜合子父母向SLE患病子女的傳遞顯著增加(X2=6,P＜0.05);單個(gè)位點(diǎn)FBAT分析顯示,在相加模型及隱性遺傳模型中均表明rs2075596位點(diǎn)A等位基因增加SLE發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(Z=2.646,P=0