PARG對(duì)人大腸癌Lovo細(xì)胞侵襲的影響及其機(jī)制探討.pdf

1、目的：探討聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶[Voly(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]對(duì)人大腸癌Lovo細(xì)胞侵襲能力的影響及其機(jī)制。
　　 方法：采用攜帶PARG-shRNA的慢病毒載體穩(wěn)定沉默Lovo細(xì)胞PARG,并以LY294002(LY)作為Akt通路的抑制劑,用細(xì)胞-基質(zhì)黏附、侵襲及遷移試驗(yàn),觀察PARG基因沉默對(duì)Lovo細(xì)胞基質(zhì)黏附、侵襲和遷移能力的影響；RT-PCR檢測(cè)聚(腺苷二磷酸核糖)聚合

2、酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]mRNA的變化,并用western blot檢測(cè)Lovo細(xì)胞PARP、NF-κB、Akt磷酸化、MMP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：⑴獲得了穩(wěn)定的PARG基因沉默Lovo細(xì)胞株。細(xì)胞基質(zhì)黏附實(shí)驗(yàn)顯示,PARG-shRNA組Lovo細(xì)胞與纖維連接蛋白的黏附率較對(duì)照組(包括空白對(duì)照和空載體對(duì)照)明顯降低(P<0.05),黏附抑制率為25.22％；tran

3、swell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示,PARG-shRNA組Lovo細(xì)胞侵襲到達(dá)膜下表面的細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組明顯減少(均P<0.05),侵襲抑制率為38.71％；transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,PARG-shRNA組Lovo細(xì)胞遷移穿過(guò)微孔膜的細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組明顯減少(均P<0.05),遷移抑制率為35.29％；而PARG-shRNA+LY組Lovo細(xì)胞與纖維連接蛋白的黏附率和侵襲遷移到膜下的細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組均無(wú)明顯變化(均P>0.05)。⑵RT-PCR

4、結(jié)果顯示,PARG-shRNA組Lovo細(xì)胞PARP mRNA表達(dá)與對(duì)照組比較有明顯減弱,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。⑶western blot結(jié)果顯示,PARG-shRNA組Lovo細(xì)胞PARP、NF-κB、MMP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)較對(duì)照組有明顯減弱:PI-Akt473蛋白表達(dá)較對(duì)照組有明顯增強(qiáng),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PARP P<0.05、NF-κB P<0.01、MMP-2 P<0.05、MMP-9 P<0.05、

5、PI-Akt473P<0.05):而PARG-shRNA+LY組Lovo細(xì)胞NF-κB、MMP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較均無(wú)明顯變化(均P>0.05)。
　　 結(jié)論：①PARG抑制可以降低Lovo細(xì)胞基質(zhì)黏附、侵襲和遷移能力,PARG在大腸癌侵襲中可能發(fā)揮重要作用。②PARG抑制可以同步降低Lovo細(xì)胞PARP、NF-κB、MMP-2和MMP-9的表達(dá),并增強(qiáng)Akt的磷酸化,同時(shí)Akt磷酸化的抑制可以阻止由于PARG