HN1家族基因和PNO1基因的克隆和功能初步研究.pdf

1、用同源克隆策略我們克隆了兩個(gè)同源的人類新基因HN1和HN1L.HN1基因位于人染色體17q25.2,由五個(gè)外顯子和四個(gè)內(nèi)含子組成.其1621bp cDNA編碼一個(gè)154個(gè)氨基酸的多肽.HN1轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生1.2和1.6-kb的兩個(gè)轉(zhuǎn)錄本,主要在睪丸和骨骼肌中表達(dá),序列分析表明這兩個(gè)轉(zhuǎn)錄本是由不同的加尾剪接而成的.HN1在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)一個(gè)18.5KDa的蛋白,HN1蛋白在HeLa細(xì)胞中定位在細(xì)胞核內(nèi).通過EST分析和特異引物擴(kuò)增的方法,我們還發(fā)現(xiàn)

2、HN1至少在肝、腦等組織通過不同剪接方式產(chǎn)生三個(gè)不同長度的差異剪接體.HN1在293T細(xì)胞中超量表達(dá)主要激活與細(xì)胞增殖和分化相關(guān)的信號(hào)通路報(bào)告基因表達(dá).流式分析儀分析穩(wěn)定表達(dá)HN1的人肝癌細(xì)胞株的細(xì)胞分裂周期特征,表明HN1表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞有顯著的S期阻滯的效應(yīng).通過酵母雙雜交方法,在人肝cDNA文庫中篩選到了一個(gè)與HN1相互作用的FAS凋亡相關(guān)蛋白FAF1的克隆,通過免疫共沉淀和細(xì)胞共定位的方法驗(yàn)證了HN1和FAF1的相互作用.HN1可

3、能和FAF1相互作用并參與FAS途徑的細(xì)胞凋亡過程.HN1L基因位于人染色體16p13.3,由五個(gè)外顯子和四個(gè)內(nèi)含子組成.其3046 bp cDNA編碼一個(gè)190氨基酸的多肽.Northern結(jié)果表明HN1L表達(dá)三個(gè)轉(zhuǎn)錄本,分別為42.4和2-kb.三個(gè)轉(zhuǎn)錄本在人16中組織中廣泛表達(dá).序列特征分析表明,我們克隆的序列為4-kb轉(zhuǎn)錄本,2-kb轉(zhuǎn)錄本是由不同的加尾信號(hào)剪接形成的,4.2-kb轉(zhuǎn)錄本可能是由原來的序列前面多剪接了一個(gè)外顯子形

4、成的.通過特異引物的方法從人肝等組織中驗(yàn)證了這個(gè)6個(gè)外顯子剪接本的存在.HN1L表達(dá)一個(gè)20.5KDa的蛋白,在HeLa細(xì)胞內(nèi)廣泛分布在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核.HN1L在293T細(xì)胞中主要激活與細(xì)胞周期相關(guān)信號(hào)通路的報(bào)告基因.文獻(xiàn)報(bào)道在多種疾病中16號(hào)染色體上HN1L附近的序列經(jīng)常有缺失的現(xiàn)象,HN1L的EST序列多為腫瘤組織來源,提示HN1L可能和腫瘤等疾病相關(guān).我們預(yù)測(cè)和鑒定了14個(gè)HN1和20個(gè)HN1L的種間同源基因和9個(gè)加工型假基因.H