發(fā)酵豆制品中乙酰膽堿酯酶抑制劑的分離純化研究.pdf

1、發(fā)酵豆制品具有多種保健功能,如降血壓、降血糖、降血脂、抗氧化、溶解血栓、抗癌、抗老年性癡呆和抗菌等。本文主要從發(fā)酵豆制品可以抗老年性癡呆癥的角度,研究了發(fā)酵豆制品中的乙酰膽堿酯酶抑制劑篩選方法的建立,提取工藝優(yōu)化,分離純化的探討等,主要研究結(jié)果如下:
　　 ⑴篩選方法的建立。建立基于分光光度法的乙酰膽堿酯酶抑制劑體外篩選模型,發(fā)現(xiàn)AchE濃度同OD值成正比例關(guān)系,即可用OD值表示酶活：通過(guò)薄層層析-生物自顯影實(shí)驗(yàn)表明,利用Ell

2、man試劑作為反應(yīng)試劑,具有較好的顯色效果。選用分光光度法測(cè)定不同地域的豆豉和腐乳提取物對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制活性,結(jié)果表明,重慶永川豆豉提取物在1.0 mg／mL時(shí)對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制率最高為52.36％。
　　 ⑵提取工藝優(yōu)化。采用乙醇回流提取工藝從豆豉中提取乙酰膽堿酯酶抑制劑,通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化豆豉中乙酰膽堿酯酶(AchE)抑制劑的提取工藝,并通過(guò)分光光度法測(cè)定豆豉提取物對(duì)AchE的抑制能力。結(jié)果表明最佳提取工藝為

3、:提取時(shí)間為90min、料液比為1:12、提取溫度為75℃、乙醇的濃度為80％。按照工藝優(yōu)化出來(lái)的條件,進(jìn)行了驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn),測(cè)得豆豉中乙酰膽堿酯酶抑制劑在1.0 mg／mL時(shí)的抑制率為53.40％。
　　 ⑶分離純化的探討。選用重慶永川豆豉作為分離材料,對(duì)其具體的活性單體進(jìn)行了系統(tǒng)的分離工作,采用萃取,大孔吸附樹(shù)脂富集,硅膠柱層析,SephadexLH-20層析和重結(jié)晶等手段。選用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取后,活性部位

4、主要分布在石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯中,通過(guò)對(duì)石油醚組分進(jìn)行純化,最后得到2個(gè)高活性組分,分別為白色晶體(1)和白色粉末(2),用10％的乙醇稀釋成1.0mg／mL,其對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制率分別為:95.27％和100.00％。通過(guò)對(duì)二氯甲烷組分進(jìn)行純化,最后得到1個(gè)高活性組分,為淡黃色粉末。用10％的乙醇稀釋成1.0mg／mL,對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制率為100.00％?；钚韵鄬?duì)于純化前有很大的提高。
　　 ⑷將分光光度法、薄層層