利用SSR和RAPD技術構建柑桔分子遺傳圖譜.pdf

1、本研究以清見桔橙(C.reticulata×C.sinensis)(母本)與強德勒柚(C.grandisOsb)(父本)的F1代102株為作圖材料，利用SSR和RAPD兩種標記，圍繞柑桔分子遺傳圖譜的構建，進行了柑桔基因組DNA提取方法的改進、適用于柑桔的SSR標記體系的建立以及SSR和RAPD標記的分離分析等方面研究，并最終構建了柑桔分子遺傳圖譜。主要結果如下： 1、適合SSR分析和RAPD分析的柑桔基因組DNA提取方法在CT

2、AB溶液中加入抗氧化劑1﹪PVP和0.2﹪β-巰基乙醇，提取的DNA粗提物呈無色透明狀，沒有褐化現(xiàn)象。 用不同生長期的材料提取柑桔基因組DNA，幼葉提取的基因組DNA質(zhì)量最好，得率最高。2、適合遺傳圖譜構建的SSR標記技術的建立通過優(yōu)化PCR反應的復性溫度和反應體系等參數(shù)，篩選多態(tài)性豐富的SSR引物，建立了適合構建柑桔遺傳圖譜的SSR分析技術：柑桔SSR分析的PCR反應體系以20μL為宜，含10×Buffer2.0μL，25mM

3、MgCl21.6μL，2.5mMdNTP1.6μL，15ng/μlPrimer各1.0μL，5U/μLTaq聚合酶0.2μL，模模板DNA(50ng/μL)1.0μL；各引物復性溫度梯度試驗結果表明，所篩選的28對SSR引物的最佳復性溫度在54℃到58℃之間。 從75對SSR引物中篩選獲得在雙親間存在多態(tài)性的引物28對，多態(tài)性比例為37.33﹪，這些引物適合用于構建柑桔遺傳圖譜的SSR分析。 3、作圖群體SSR分析用篩選

4、出的28對引物對F1群體進行SSR分析，共獲得穩(wěn)定、至少可重復1次的多態(tài)性帶型59條，平均每對引物可產(chǎn)生2.1條多態(tài)性條帶。經(jīng)卡方測驗，獲得的59個SSR多態(tài)性位點中，有34個位點符合孟德爾分離比例(1∶1)，可用于構建分子遺傳圖譜；其余25個位點因不符合孟德爾分離比例而不能用于作圖。 4、作圖群體RAPD分析從20個RAPD隨機引物中篩選獲得在雙親間存在多態(tài)性的引物8個，多態(tài)性比例為40﹪。用篩選出的8個隨機引物對F1群體進行

5、多態(tài)性分析，共獲得穩(wěn)定、至少可重復1次的多態(tài)性帶型21個，平均每個引物可產(chǎn)生2.64條多態(tài)性條帶。經(jīng)卡方測驗，獲得的21個RAPD多態(tài)性位點中，有11個位點符合孟德爾分離比例(1∶1)，可用于作圖；其余10個位點因不符合孟德爾分離比例而不能用于作圖。 5、柑桔分子遺傳圖譜的構建利用SSR和RAPD標記構建了一張包含11個連鎖群，由45個標記位點組成的柑桔(2n=18)分子遺傳圖譜，其中包括34個SSR標記，11個RAPD標記，圖