維生素D治療大鼠結(jié)腸炎模型療效觀察及免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的初探.pdf

1、研究背景
　　 炎癥性腸病是一組發(fā)病原因尚不明確的亞急性和慢性腸道炎癥性疾病，其臨床類型主要包括UC和CD?，F(xiàn)在普遍認(rèn)為CD是Th1細(xì)胞異常激活引起的疾病。維生素D近年來被發(fā)現(xiàn)在多種自身免疫性疾病中有重要的免疫調(diào)節(jié)作用，尤其是Th1細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫疾病。維生素D對免疫的調(diào)控可以通過多個(gè)途徑達(dá)到，其中之一就是調(diào)控APC上的TLRs家族的表達(dá)及功能。通過TLRs信號(hào)通路可影響初始T細(xì)胞的分化，改變Th1細(xì)胞和Treg細(xì)胞在組織中的

2、比例。目前有國外研究小組在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)上使用1,25(OH)2D3干預(yù)，發(fā)現(xiàn)1,25(OH)2D3有抑制炎癥性腸病腸道炎癥的作用。但尚無使用維生素D3及其不同劑量對于IBD療效比較的研究。
　　 研究目的
　　 探索維生素D3和1,25(OH)2D3對IBD動(dòng)物模型的療效及其可能的免疫機(jī)制。
　　 研究方法
　　 54只SD大鼠隨機(jī)分為9組，每組6只，分為：空白對照組，TNBS組,5-ASA(0.4g/kg/

3、d)組，活性VD(1,25(OH)2D30.2ug/kg/d)組，活性VD(1,25(OH)2D30.2ug/kg/d)+5-ASA(0.4g/kg/d)組，大劑量維生素D3(7500IU/d)組，大劑量維生素D3(7500IU/d)+5-ASA(0.4g/kg/d)組，小劑量維生素D3(1800IUonce)組，小劑量維生素D3(1800IUonce)+5-ASA(0.4g/kg/d)組。治療9天后于第10天處死取材。采用DAI評分，

4、大體炎癥評分，組織病理評分和結(jié)腸組織MPO測定來進(jìn)行炎癥程度的評估。采用免疫組化的方法評估TLR4、TLR9、Foxp3在各組大鼠結(jié)腸局部中的表達(dá)。并用RT-PCR法測定大鼠結(jié)腸組織中TLR9mRNA的含量。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 1、各TNBS處理組DAI評分、大體評分、組織病理學(xué)評分和MPO測定均較空白對照組明顯升高(P＜0.01)。各治療組結(jié)腸組織MPO值均顯著低于TNBS組(P＜0.01)，但仍高于空白對照組。各

5、治療組DAI評分、大體評分和組織病理學(xué)評分較TNBS組無明顯下降（P＞0.05）。各治療組之間療效無明顯差異(P＞0.05)。大劑量VD組和大劑量VD+5-ASA組血清鈣顯著高于其余各組（P＜0.01）。大劑量VD組血清肌酐高于其余各組(P＜0.05)。
　　 2、空白對照組結(jié)腸固有層和粘膜下層炎性細(xì)胞胞膜和胞質(zhì)僅有少量TLR4和TLR9表達(dá)。TNBS造模組可見大量TLR4和TLR9表達(dá)，較空白組明顯增多(P＜0.01)。在空白

6、對照組中僅有散在的Foxp3表達(dá)，主要不均勻分布于粘膜固有層淋巴細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)。TNBS組中Foxp3表達(dá)較空白組明顯增多(P＜0.01)。單純5-ASA治療組TLR4、TLR9和Foxp3表達(dá)較TNBS組弱(P＜0.05)。各維生素D干預(yù)組TLR9和Foxp3表達(dá)較TNBS組弱(P＜0.05)，而TLR4表達(dá)較TNBS組無明顯差異(P＞0.05)。各維生素D干預(yù)組之間TLR4、TLR9和Foxp3表達(dá)無明顯差異（P＞0.05）。TLR

7、9mRNA在空白對照組中表達(dá)較少。各組之間條帶灰度比值無差異（P＞0.05）。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
　　 1、5-ASA、維生素D3和1,25(OH)2D能緩解大鼠結(jié)腸炎癥，聯(lián)合使用維生素D3和5-ASA及聯(lián)合使用1,25(OH)2D和5-ASA療效無增強(qiáng)。維生素D3抑制炎癥的作用和劑量無關(guān)。
　　 2、正常大鼠結(jié)腸中TLR4、TLR9和Foxp3的表達(dá)較少。
　　 3、TNBS誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸組織中TLR4、