胡楊離體形態(tài)建成及組織學(xué)觀察.pdf

1、胡楊(Populus euphtatica)是天然分布在荒漠平原地區(qū)少有的喬木樹種之一，具有優(yōu)良的耐鹽堿、抗旱、抗沙埋以及很強的防風(fēng)、固沙能力，是十分珍貴的木本植物抗逆種質(zhì)資源。新疆南部塔里木盆地分布的荒漠胡楊林，是世界范圍內(nèi)胡楊林分布最集中的地區(qū)，為胡楊生態(tài)和經(jīng)濟價值各項研究提供寶貴的財富。本文以胡楊苗葉片和莖尖、成年胡楊的葉片及腋芽等多種材料為外植體對胡楊離體培養(yǎng)中器官發(fā)生和體胚發(fā)生兩種途徑進行了研究，探討了各種因素對兩種再生方式的

2、影響；首次用胡楊苗的葉片誘導(dǎo)出了胡楊體細(xì)胞胚并再生出植株；用石蠟切片方法跟蹤觀察了不同類型的愈傷組織、不定芽和體胚的發(fā)生、發(fā)育過程以及再生苗各個器官的組織結(jié)構(gòu)，為胡楊工程育種等研究提供了關(guān)鍵的技術(shù)平臺?，F(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)如下： 1．以不同采集時間的胡楊苗葉片為外植體，研究發(fā)現(xiàn)外植體的采集周期等生理狀況、植物激素水平及培養(yǎng)條件等因素影響愈傷的誘導(dǎo)效率和不同再生途徑的發(fā)生。結(jié)果表明：附加了0.75mg/L隊和0.5mg/LNAA的基本

3、培養(yǎng)基(MS培養(yǎng)基加入20mg/L腺嘌呤，400mg/L水解乳蛋白，25g/L蔗糖及0.45％瓊脂)是誘導(dǎo)葉片愈傷組織的最佳培養(yǎng)基，將胡楊苗葉片來源的外植體在黑暗下培養(yǎng)三周然后轉(zhuǎn)入光下，其中10-11月間采集的葉片愈傷組織誘導(dǎo)率在67％，而3-4月間采集的葉片的誘導(dǎo)率達(dá)到98％；誘導(dǎo)出的愈傷組織松軟、較為透明，多為乳白色和淡黃色，容易繼代保持、增殖效果好，經(jīng)適當(dāng)?shù)奶幚砟軌蚍只霾欢ㄑ炕蝮w胚，表現(xiàn)出很好的分化能力。而采用成年胡楊幼葉作為外

4、植體在同一條件下誘導(dǎo)率低，并且得到的愈傷組織要及時轉(zhuǎn)瓶否則容易褐化。 2.3-4月采集的胡楊苗葉片來源的愈傷組織，在附加0.25mg/L BA和0.1mg/LNAA的基本培養(yǎng)基上誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽最多，誘導(dǎo)率達(dá)89％；不定芽在附加0.1mg/LBA，0.25mg/LNAA和15g/L蔗糖的基本培養(yǎng)基上可有效拔節(jié)并扶壯；探索了胡楊再生苗的生根及移栽的過程，附加0.05mg/L IBA，0.1mg/LNAA和15g/L蔗糖，大量元素減半

5、的MS培養(yǎng)基是最佳生根培養(yǎng)基。上述培養(yǎng)條件均為16h光周期的較強光照(45μmol m<'-2>s<'-1>)下，白天溫度為25±2℃，夜間14±2℃，所有培養(yǎng)基均每三周繼代一次。 3.10-11月采集的胡楊苗葉片誘導(dǎo)的愈傷組織在含有NAA、TDZ或BA的培養(yǎng)基上繼代而產(chǎn)生的胚性愈傷，經(jīng)過連續(xù)篩選及誘導(dǎo)獲得了大量的胚狀體。附加0.5mg/LBA，0.5mg/L NAA的基本培養(yǎng)基，16h光周期(15 μmol m<'-2>s<

6、'-1>)的較弱光照以及較低溫度(14±2℃)是胚狀體發(fā)生和發(fā)育的最佳條件。由于體胚發(fā)育的不同步化性，同一培養(yǎng)基上可以觀察到發(fā)育至各個時期的胚狀體。通過干化處理，大部分體胚能夠經(jīng)子葉胚萌發(fā)成苗。體胚發(fā)生途徑得到的再生苗生活力強且易于分離，因而存活率較高。 4.以成年胡楊腋芽來源的愈傷組織為實驗材料，討論了不同濃度的2，4-D、ABA、PEG及蔗糖在胚性愈傷誘導(dǎo)及胚狀體發(fā)生、發(fā)育，尤其是體胚成熟過程中的作用；并且通過對胚性愈傷組織