LOX-1-NF-κB信號途徑對內(nèi)皮細(xì)胞Toll樣受體4和炎癥因子表達(dá)的影響及氟伐他汀干預(yù)的研究.pdf

1、第一章LOX-1/NF-K B信號途徑對氧化低密度脂蛋白刺激的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)TLR4的影響及氟伐他汀的干預(yù)作用。 背景與目的:目前認(rèn)為動脈粥樣硬化是一種免疫炎癥性疾病。Toll樣受體4(TLR4)是介導(dǎo)天然免疫和炎癥反應(yīng)的一種模式識別受體，對動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展起著非常重要的作用。氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作為致動脈粥樣硬化的獨立危險因素，可通過其特異性受體一血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX-1)結(jié)合、攝取及降

2、解并介導(dǎo)其生物學(xué)功能。TLR4與LOK-1在粥樣斑塊內(nèi)皮細(xì)胞中均有高表達(dá)。己證實ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞TLR4表達(dá)上調(diào)，提示TLR4在脂質(zhì)介導(dǎo)的促炎癥反應(yīng)中發(fā)揮作用；脂多糖(LPS)可通過TLR4/NF-KB途徑上調(diào)LOX-1的表達(dá)，加劇動脈粥樣硬化的進程。這些表明，TLR4與LOX-1在動脈粥樣硬化免疫炎癥反應(yīng)中關(guān)系緊密。NF-KB作為核轉(zhuǎn)錄因子，它可誘導(dǎo)TLR4的表達(dá)及調(diào)節(jié)其下游信號傳導(dǎo)，由而推測可能存在LOX-1/NF-K B-

3、TLR4信號通路，故本章探討TLR4與LOX-1的相互作用和調(diào)節(jié)機制，及氟伐他汀對該信號通路的調(diào)節(jié)作用，從而為動脈粥樣硬化防治提供新的理論依據(jù)。 方法: 培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVECs)，予ox-LDL刺激及LOX-1中和抗體、NF-k B抑制劑二硫代氨基甲酸酯(PDTC)和不同濃度氟伐他汀進行干預(yù)，采用RT-PCR技術(shù)檢測LOX-1和TLR4mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果在ox-LDL各劑量組(25、50、100mg/

4、L)均可上調(diào)HUVECsLOX-1及TLR4mRNA的表達(dá)，在25-50mg/L劑量范圍內(nèi)呈顯著的劑量-效應(yīng)關(guān)系(P<0.01)。預(yù)先分別給予LOX-1中和抗體和NF-kB抑制劑PDTC干預(yù)，LOX-1及TL,R4mRNA的表達(dá)均下調(diào)。予以不同濃度氟伐他汀干預(yù)呈濃度依賴性降低ox-LDL刺激的HUVECs LOX-1及TLR4mRNA的表達(dá)。 結(jié)論: 1.本研究證實HUVECs存在對ox-LDL具有特異性和高親和力的受體

5、-LOX-1，且ox-LDL可上調(diào)HUVECsLOX-1的表達(dá)。 2.LOX-1/NF-K B信號激活上調(diào)HUVECsTLR4的表達(dá)，提示ox-LDL可經(jīng)LOX-1受體介導(dǎo)活化TLR4，從而加重ox-LDL對內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，這可能是TLR4參與動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展機制之一。同時從受體水平將脂蛋白、炎癥/免疫與動脈粥樣硬化緊密聯(lián)系起來。 3.NF-kB在ox-LDL介導(dǎo)的效應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用，干預(yù)LOX-1/NF-kB信

6、號可能成為防治動脈粥樣硬化的靶目標(biāo)。 4.氟伐他汀可抑制ox-LDL誘導(dǎo)的TLR4表達(dá)上調(diào)，抑制內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)，從而發(fā)揮其獨立于降脂外的抗炎抗免疫效應(yīng)。 第二章LOX一1/NF_K B信號途徑在氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥因子表達(dá)中的作用及氟伐他汀干預(yù)。 研究背景與目的:動脈粥樣硬化(AS)是一種慢性炎癥性疾病。炎癥反應(yīng)貫穿于血管內(nèi)皮功能障礙、泡沫細(xì)胞形成、粥樣斑塊產(chǎn)生和破裂過程的各個階段，在動脈

7、粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展起著極其重要的作用。已證實氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)為致動脈粥樣硬化的重要物質(zhì)。血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)作為血管內(nèi)皮細(xì)胞膜上ox-LDL的特異性受體，它的誘導(dǎo)表達(dá)介導(dǎo)了ox-LDL的多種致AS作用。本章擬探討LOX-1是否介導(dǎo)ox-LDL上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子IL-6和TNF-a的表達(dá)，及氟伐他汀的干預(yù)作用，為動脈粥樣硬化的防治提供新的理論依據(jù)。 材料與方法: 培

8、養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVECs)，予ox-LDL刺激及LOX-1中和抗體、NF-K B抑制劑PDTC和不同濃度氟伐他汀進行干預(yù)，采用ELISA檢測細(xì)胞上清液中炎癥細(xì)胞因子IL-6和TNF-a的表達(dá)。 結(jié)果: 在ox-LDL各劑量組(25、50、100mg/L)均可上調(diào)HUVECs上清液中IL-6和TNF-a的表達(dá)，在25-50mg/L劑量范圍內(nèi)呈顯著的劑量一效應(yīng)關(guān)系(P<0.01)。預(yù)先給予LOX-1中和抗體和NF-

9、KB抑制劑PDTC干預(yù)后IL-6和TNF-a的表達(dá)減少；預(yù)先予以不同濃度氟伐他汀干預(yù)24小時呈濃度依賴性降低ox-LDL刺激的 HUVECs上清液中IL-6和TNF-a的分泌。 結(jié)論: 1．ox-LDL可刺激HUVECs上清液中炎癥因子TNF-a和IL-6的表達(dá)，在25-50mg/L劑量范圍內(nèi)呈顯著的劑量一效應(yīng)關(guān)系。 2．LOX-1/NF-kB信號途徑活化可上調(diào)內(nèi)皮炎癥因子TNF-a和IL-6的表達(dá)，提示LOX-