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文檔簡介
1、皮膚黑素瘤(malignant melanoma)起源于皮膚黑素細胞,惡性程度極高,發(fā)生發(fā)展過程中涉及大量基因異常表達,具體機制尚不清楚。SATB1是一種核基質附著區(qū)結合蛋白,近來發(fā)現(xiàn)在乳腺癌等多種惡性腫瘤表達水平顯著升高,可能對腫瘤生長和轉移起促進作用,而在黑素瘤的表達和作用尚未見報道。本研究通過檢測SATB1在黑素瘤的表達狀況及其表達水平,探討對黑素瘤生長和轉移能力的影響,初步揭示SATB1與皮膚黑素瘤的相關性。
第一
2、部分:SATB1在黑素瘤細胞系及組織的表達
采用半定量RT-PCR法,以2例正常黑素細胞和乳腺癌細胞系MDA-MB-231為對照,比較SATB1 mRNA在人黑素瘤細胞系A375、M14和MV3的表達水平。結果顯示,與MDA-MB-231細胞相似,A375和MV3細胞高水平表達SATB1mRNA,A375細胞表達水平最高,M14細胞表達水平稍低,而2例正常黑素細胞均不表達。
采用蛋白印跡法,以正常黑素細胞為對
3、照,比較SATB1在上述黑素瘤細胞系的表達水平;以6例色素痣為對照,比較SATB1在8例黑素瘤組織標本的表達水平。結果顯示,正常黑素細胞不表達SATB1,而黑素瘤細胞系A375、M14和MV3均高水平表達SATB1;色素痣和黑素瘤組織均表達SATB1,但黑素瘤(1.10±0.32)的表達水平顯著高于色素痣(0.53±0.28)(P<0.05),差異有統(tǒng)計學意義。
SATB1的mRNA和蛋白質在黑素瘤表達水平均異常升高,提示
4、其可能對黑素瘤的發(fā)生和發(fā)展起促進作用。
第二部分:抑制SATB1表達對A375細胞增殖和侵襲轉移的影響
構建SATB1的RNAi干擾質粒表達載體,轉染高水平表達SATB1的黑素瘤A375細胞系并篩選穩(wěn)定表達克隆,在mRNA和蛋白質水平均顯示SATB1的表達水平明顯下降(分別為未轉染組細胞的23.21%和34.57%),即對干擾前后不同SATB1表達水平A375細胞的增殖能力和侵襲轉移能力進行了比較性研究。
5、r> 在增殖能力方面,首先在體外細胞計數(shù)并繪制增殖曲線、流式細胞術分析細胞周期,然后在動物體內建立皮下移植瘤模型,比較成瘤潛伏期、腫瘤生長速度和腫瘤質量。結果顯示,低水平表達SATB1的A375細胞在24 h、48 h和72 h的細胞數(shù)明顯少于高水平表達SATB1者,且隨著時間的推移差距逐漸增大,增殖曲線較為平坦;在動物體內形成移植瘤的成瘤潛伏期(8.17±2.86天),較高水平表達SATB1的A375細胞的成瘤潛伏期(4.83±
6、1.17天;5.33±0.82天)明顯延長(P<0.05),生長曲線較為平坦,且形成的腫瘤質量(0.65±0.36 g)顯著低于高水平表達SATB1的A375細胞(1.44±0.75 g;1.52±0.74 g)(P<0.05),差異有統(tǒng)計學意義。無論在體外還是動物體內,抑制高水平表達的SATB1均可導致A375細胞的增殖能力明顯下降,提示SATB1的表達可能對黑素瘤的增殖能力具有促進作用,抑制其表達可能對黑素瘤的增殖能力具有減弱作用。
7、細胞周期分析顯示雖G1期和凋亡細胞比例較高而G2和S期細胞比例較低,但差異無統(tǒng)計學意義,其機制有待進一步研究。
在侵襲轉移能力方面,首先在體外比較不同SATB1表達水平的A375細胞穿過重建基底膜的能力,然后建立裸鼠黑素瘤肺轉移模型,比較不同SATB1表達水平的A375細胞在體內形成肺轉移灶的能力。結果顯示,低水平表達SATB1的A375細胞穿過重建基底膜的細胞數(shù)(3.92±2.71)明顯少于高表達的(31.92±6.93
8、;35.83±7.46);SATB1表達受到抑制的A375細胞在裸鼠肺部形成的轉移灶明顯縮小,轉移灶面積比(0.08±0.05)較未轉染組(0.37±0.22)和空白組(0.40±0.12)明顯減小(P<0.05),差異具有統(tǒng)計學意義。體外和動物體內實驗結果提示,SATB1的表達可能對黑素瘤的侵襲轉移具有促進作用,抑制其表達可能對黑素瘤的侵襲轉移能力具有減弱作用。
結論:
SATB1在黑素瘤細胞系和組織標本的
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