兒童孤獨癥的高危因素及早期特征、血漿谷氨酸和γ-氨基丁酸濃度、Reelin基因多態(tài)性的研究.pdf

1、目的: (1)研究兒童孤獨癥發(fā)病的高危因素及孤獨癥兒童的早期發(fā)育特征。 (2)研究血漿谷氨酸和γ-氨基丁酸濃度變化與兒童孤獨癥的關(guān)系，及其在兒童孤獨癥易發(fā)癲癇病理機制中的作用。 (3)通過對Reelin基因上四個單核苷酸多態(tài)(SNP)位點rs736707、rs2229864、rs362691、rs2073559的檢測，探討Reelin基因多態(tài)性與兒童孤獨癥的關(guān)系。 方法: (1)共入組兒童孤獨癥核

2、心家系278例及正常對照兒童核心家系200例，調(diào)查一般人口學資料、母孕期情況、圍產(chǎn)期情況、發(fā)育性標志出現(xiàn)時間、養(yǎng)育情況、既往史、家族史及體格檢查情況；對于孤獨癥兒童，尚需調(diào)查早期癥狀表現(xiàn)、評定兒童孤獨癥評定量表(CARS)及孤獨癥行為檢查量表(ABC)。 (2)27例伴癲癇的孤獨癥患者作為觀察組，30例不伴癲癇的孤獨癥患者為另一觀察組，36例正常兒童作為對照組。采用高效液相色譜法測定三組血漿谷氨酸和γ-氨基丁酸濃度，進行組間比較

3、。 (3)在中國漢族孤獨癥核心家系(孤獨癥患者234人，父母399人)及正常對照人群(286人)中，檢測Reelin基因上四個單核苷酸多態(tài)位點rs736707、rs2229864、rs362691、rs2073559，采用TaqMan-PCR的方法確定樣本各位點的基因型，進行以核心家系為基礎(chǔ)的傳遞不平衡檢驗及病例對照的關(guān)聯(lián)研究。 (4)采用DNA測序和序列分析的方法，驗證TaqMan-PCR等位基因鑒別分析技術(shù)的準確性。

4、 (5)使用GENEHUNTER(version2.1)軟件對孤獨癥核心家系進行傳遞不平衡分析，使用SAS軟件包構(gòu)建單倍體模型，以x2檢驗比較組間差異。統(tǒng)計分析采用SPSS14.0軟件包，根據(jù)資料特征分別進行獨立樣本t檢驗、x2檢驗、方差分析、Logistic回歸分析以及計算暴露因素的優(yōu)勢比(OR值)。 結(jié)果: (1)兒童孤獨癥先證者中男性233人，女性45人，男女比例為5.18:1；患者起病年齡為22.36±8

5、.29月。家長感覺到孩子異常最早是在10個月時，最晚在48個月。 (2)與正常兒童相比，孤獨癥患者的多項圍產(chǎn)期和母孕期高危因素差異具有顯著性。Logistic回歸發(fā)現(xiàn)：母親受教育年限(P=0.009)、父親生育年齡(P=0.001)、家庭負擔(P=0.001)、撫育者(P=0.001)、妊娠反應(yīng)、孕期服藥史、分娩方式、養(yǎng)育方式、主要教導(dǎo)者、陽性家族史(P=0.002)進入回歸方程。 (3)計算回歸方程中有臨床意義的6項指

6、標的組間優(yōu)勢比(OR值)，從強到弱依次為父親生育年齡>30歲(OR=6.715)、家族史陽性(OR=5.798)、孕期服用藥物(OR=4.653)、非自然分娩(OR=4.147)、母親受教育年限>11年(OR=1.373)、妊娠反應(yīng)中/重度(OR=1.044)。 (4)與對照組兒童相比，孤獨癥兒童的各項發(fā)育性標志出現(xiàn)時間、孤獨癥早期表現(xiàn)總分、頭圍等指標，差異具有統(tǒng)計學意義。 (5)不伴癲癇的孤獨癥組(A組)血漿谷氨酸濃度

7、為653.95±545.87pmol/L，伴有癲癇的孤獨癥組(B組)血漿谷氨酸濃度為1608.81±1478.22pmol/L，正常對照兒童(C組)血漿谷氨酸濃度為653.70±589.86pmol/L。A組與B組相比，差異具有顯著性；B組與C組相比，差異具有顯著性；A組與C組相比，無顯著性差異。A組血漿γ-氨基丁酸濃度為71.46±65.98pmol/L，B組為111.19±85.27pmol/L，C組為70.13±51.36pmol

8、/L。A組與B組相比，差異具有顯著性；B組與C組相比，差異具有顯著性；A組與C組相比，無顯著性差異。 (6)孤獨癥核心家系單位點SNP傳遞不平衡分析，四個位點均無顯著性差異；四個位點組成的單倍體中GTCC 5條全部未傳遞，未傳遞存在顯著性差異，其余各單倍體未發(fā)現(xiàn)不平衡傳遞。 對照組樣本在四個SNPs多態(tài)位點上全部符合H-W平衡。病例對照關(guān)聯(lián)研究中，孤獨癥組與對照組四個SNPs多態(tài)位點基因型及等位基因頻率比較均未發(fā)現(xiàn)顯著性

9、差異。 孤獨癥組與對照組單倍體分型比較中，rs362691-rs2073559相鄰兩位點的CC、CT、GC三種單倍體，每一單倍體頻率在兩組之間比較，差異均無顯著性；而GT單倍體頻率在兩組之間差異具有顯著性(x2=5.805，P=0.020)。兩組單倍體頻率構(gòu)成具有顯著性差異。其余相鄰兩位點、三位點以及四個位點組合的每一單倍體頻率、以及單倍體頻率構(gòu)成均無顯著性差異。 結(jié)論: (1)兒童孤獨癥在母孕期、圍產(chǎn)期高危因素

10、明顯增多，前三位的高危因素分別是父親生育年齡大于30歲、家族史陽性、孕期服用藥物史。 (2)孤獨癥兒童整體發(fā)育落后于正常對照兒童，而且在發(fā)育過程中具有某些特征性的早期表現(xiàn)，有望被早期識別。 (3)血漿谷氨酸/γ-氨基丁酸濃度異常在孤獨癥兒童中并不具有普遍性，僅在伴有癲癇的孤獨癥兒童中有異常升高。谷氨酸/γ-氨基丁酸系統(tǒng)功能異?？赡苁枪陋毎Y易發(fā)癲癇的病理機制之一。 (4)以孤獨癥核心家系為基礎(chǔ)的傳遞不平衡檢驗未發(fā)現(xiàn)