基于DNA芯片技術(shù)的Reelin信號通路相關(guān)基因多態(tài)性及基因間交互作用與漢族兒童孤獨(dú)癥關(guān)系的研究.pdf

1、目的：
　　 (1)研究Reelin信號通路相關(guān)基因的多態(tài)性與漢族兒童孤獨(dú)癥的關(guān)聯(lián)；
　　 (2)研究Reelin信號通路相關(guān)基因的交互作用與漢族兒童孤獨(dú)癥易感性的關(guān)系；
　　 (3)研究Reelin信號通路相關(guān)基因的多態(tài)性與漢族兒童孤獨(dú)癥臨床表型的關(guān)系。
　　 方法：
　　 (1)采用Illumina CNV370-Duo芯片對455例符合DSM-Ⅳ診斷標(biāo)準(zhǔn)的兒童孤獨(dú)癥患者及97例正常對照進(jìn)行全

2、基因組SNP分型，從中選取Reelin信號通路6個基因(RELN、DAB1、VLDLR、LRP8、FYN、CDK5)所有SNP的數(shù)據(jù)，與中南大學(xué)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室遺傳資源庫的另外358例正常對照的相應(yīng)數(shù)據(jù)合并，對數(shù)據(jù)進(jìn)行篩選，然后對每個基因均采用Haploview4.1軟件進(jìn)行單位點(diǎn)的病例-對照關(guān)聯(lián)分析，以及基于連鎖不平衡分析基礎(chǔ)上的單體型病例-對照關(guān)聯(lián)分析。置換檢驗(yàn)被用于對關(guān)聯(lián)分析的結(jié)果進(jìn)行校正（置換次數(shù)＝1000）。
　

3、　 (2)采用“標(biāo)記SNP＋連鎖結(jié)構(gòu)域”策略選擇基因間交互作用研究的SNP位點(diǎn)，6個基因共計入選48個位點(diǎn)。多因子降維分析(MDR)方法被用于探索孤獨(dú)癥患者Reelin信號通路相關(guān)基因間的交互作用，選擇具有最大的交叉驗(yàn)證一致性、最大檢驗(yàn)準(zhǔn)確度且置換檢驗(yàn)結(jié)果具有顯著性的組合作為基因間交互作用的最佳模型。
　　 (3)剔除15例臨床資料不完整的患者，將440例孤獨(dú)癥患者按照“退化”臨床表型分為退化組（180例）和非退化組（260例

4、），按照“不遵從行為”臨床表型分為不遵從組（177例）和遵從組（263例），x2檢驗(yàn)被用于比較上述48個位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率的組間差異。
　　 結(jié)果：
　　 (1)經(jīng)置換檢驗(yàn)后，單位點(diǎn)關(guān)聯(lián)分析顯示RELN的99個SNPs與孤獨(dú)癥均無顯著關(guān)聯(lián)（P均大于0.05）；單體型關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)AAGTATCATGGG單體型頻率和CTTAGCCG單體型頻率在對照組顯著高于孤獨(dú)癥組（x2分別為8.658，10.000；校正后的P值

5、分別為0.015，0.002）；
　　 (2)經(jīng)置換檢驗(yàn)后，單位點(diǎn)關(guān)聯(lián)分析顯示DAB1的154個SNPs與孤獨(dú)癥均無顯著關(guān)聯(lián)（P均大于0.05），單體型關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)GGTTTGGCATTTC單體型頻率在孤獨(dú)癥組顯著高于對照組（x2＝8.461，校正后的P＝0.019）；
　　 (3)經(jīng)置換檢驗(yàn)后，LRP8、VLDLR、FYN和CDK5所有SNPs的等位基因頻率及單體型頻率在孤獨(dú)癥組和對照組無顯著性差異（P均大于0.05）

6、；
　　 (4) MDR分析顯示三位點(diǎn)基因型組合（rs1454627-rs6943822-rs722187)是孤獨(dú)癥患者Reelin信號通路相關(guān)基因間交互作用的最佳模型（交叉驗(yàn)證一致性9/10，檢驗(yàn)準(zhǔn)確度0.822，P＜0.001）；
　　 (5) RELN的rs10487160位點(diǎn)的基因型分布和等位基因分布在退化型孤獨(dú)癥亞組和非退化型孤獨(dú)癥亞組間均存在顯著性差異（x2分別為10.570和10.190，P值分別為0.00

7、5和0.001），退化亞組GG基因型頻率與G等位基因頻率顯著高于非退化亞組；rs12666897位點(diǎn)的基因型分布和等位基因分布在兩個亞組間亦存在顯著性差異（x2分別為6.019和4.874，P值分別為0.049和0.027），退化亞組AC基因型頻率及C等位基因頻率顯著高于非退化亞組；
　　 (6) RELN的rs17157128位點(diǎn)基因型分布和等位基因分布在不遵從組和遵從組之間有顯著性差異（x2分別為9.165和4.472，P值

8、分別為0.010和0.034），不遵從亞組AA基因型頻率和A等位基因頻率顯著高于遵從亞組；
　　 (7) DAB1的rs3131735位點(diǎn)的基因型分布在不遵從亞組和遵從亞組間存在顯著性差異(x2＝8.430,P＝0.015)，AG基因型頻率在不遵從組的顯著高于遵從組；
　　 (8) LRP8的rs1288520位點(diǎn)基因型分布和等位基因分布在退化組和非退化組之間有顯著性差異（x2分別為7.790和7.095，P值分別為0.

9、020和0.008），GG基因型頻率和G等位基因頻率在退化亞組顯著高于非退化亞組。
　　 (9) VLDLR的rs1454627位點(diǎn)基因型分布和等位基因分布在退化組和非退化組之間有顯著性差異（x2分別為7.143和4.127，P值分別為0.028和0.042），TT基因型頻率和T等位基因頻率在退化亞組顯著高于非退化亞組；
　　 結(jié)論：
　　 (1) RELN可能不是中國漢族兒童孤獨(dú)癥的易感基因，其AAGTATCA

10、TGGG單體型和CTTAGCCG單體型反而可能是孤獨(dú)癥的保護(hù)因素；
　　 (2) DAB1上的GGTTTGGCATTTC單體型與孤獨(dú)癥存在顯著的正性關(guān)聯(lián)，DAB1可能是中國漢族兒童孤獨(dú)癥的易感基因之一；
　　 (3) LRP8、VLDLR、FYN和CDK5的單核甘酸多態(tài)性均與中國漢族兒童孤獨(dú)癥無關(guān)；
　　 (4) DAB1-RELN- VLDLR基因間交互作用與中國漢族兒童孤獨(dú)癥的發(fā)病機(jī)制有關(guān)；
　　 (

11、5) RELN的rs10487160位點(diǎn)以及rs12666897位點(diǎn)多態(tài)性與孤獨(dú)癥患者的“退化”臨床表型有關(guān)；
　　 (6) RELN的rs17157128位點(diǎn)多態(tài)性與孤獨(dú)癥患者的“不遵從行為”臨床表型有關(guān)；
　　 (7) DAB1的rs3131735位點(diǎn)多態(tài)性與孤獨(dú)癥患者的“不遵從行為”臨床表型有關(guān)；
　　 (8) LPR8的rs1288520位點(diǎn)多態(tài)性與孤獨(dú)癥患者的“退化”臨床表型有關(guān)；
　　 (9)