骨膜與膠原膜固定自體軟骨細(xì)胞修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：比較自體骨膜與膠原膜覆蓋、固定移植的自體軟骨細(xì)胞修復(fù)軟骨缺損的療效，為臨床軟骨缺損修復(fù)提供指導(dǎo)和數(shù)據(jù)支持。
　　方法：采用大型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物豬3頭，先分別取膝關(guān)節(jié)非負(fù)重區(qū)軟骨，體外分離培養(yǎng)并擴(kuò)增后，回植入膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處。關(guān)節(jié)軟骨缺損的建立是在3頭豬6個(gè)膝關(guān)節(jié)髕切跡上下共建立18個(gè)全層軟骨缺損（每個(gè)膝關(guān)節(jié)造3個(gè)缺損，分別隨機(jī)為骨膜覆蓋、膠原膜覆蓋以及空白對(duì)照組），術(shù)后3個(gè)月對(duì)軟骨缺損形態(tài)的大體標(biāo)本修復(fù)情況，并通過(guò)石蠟病理切片，用H

2、E、甲苯胺藍(lán)及番紅O染色，參照O`Driscoll,Keeley and Salter組織學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)修復(fù)后的軟骨組織進(jìn)行組織學(xué)分析，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果：軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)情況：剛接種的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞為球形，12~24h后逐漸開(kāi)始貼壁，并逐漸伸展成長(zhǎng)為三角形和多角形，慢慢地軟骨細(xì)胞間開(kāi)始出現(xiàn)突起相連接，有抱團(tuán)生長(zhǎng)的趨勢(shì)。約5d開(kāi)始細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，逐漸呈現(xiàn)“鋪路石”樣外觀，14d軟骨細(xì)胞已達(dá)90％融合。結(jié)合取材部位和通過(guò)

3、甲苯胺藍(lán)染色進(jìn)行鑒定，得到軟骨細(xì)胞。
　　肉眼觀察軟骨修復(fù)效果：術(shù)后3月，骨膜組、膠原膜組和空白組的軟骨缺損處均有不同程度的修復(fù)。關(guān)節(jié)腔無(wú)粘連，未見(jiàn)炎癥表現(xiàn)，關(guān)節(jié)液的量及性狀未見(jiàn)明顯異常。
　　骨膜組：1.肉眼觀：移植軟骨與周圍軟骨色澤相近，表面有毛糙感，欠光滑，修復(fù)組織恢復(fù)了關(guān)節(jié)軟骨表面的完整性，部分修復(fù)區(qū)輪廓模糊不清，部分界限可見(jiàn)。邊緣未見(jiàn)新生物，軟骨無(wú)明顯退變。2.組織學(xué)改變：軟骨表層的平整程度與正常組相比較差，小個(gè)幼

4、稚的軟骨細(xì)胞較多，呈圓形或長(zhǎng)梭形，涵蓋了表層及中層的大部，深層軟骨細(xì)胞大小較正常組小，排列紊亂。軟骨基質(zhì)較正常組偏紅，基質(zhì)中可見(jiàn)大量平行或交織排列的膠原纖維束，呈纖維軟骨樣修復(fù)。
　　膠原膜組：1.肉眼觀：移植軟骨與周圍軟骨色澤基本一致，表面平整，與正常軟骨面曲率相近，表面無(wú)明顯凹陷或隆起，探針按壓，質(zhì)韌、較硬，有彈性。移植軟骨與周圍軟骨愈合好，邊緣無(wú)新生物，隱約可見(jiàn)移植軟骨與周圍軟骨的界限，無(wú)軟骨退變。2.組織學(xué)改變：軟骨表層修

5、復(fù)比骨膜組平整，小個(gè)幼稚的軟骨細(xì)胞較比骨膜組較少，細(xì)胞形態(tài)為圓形、橢圓形或長(zhǎng)梭形，深層軟骨細(xì)胞大小較正常組小，排列紊亂。軟骨基質(zhì)顏色接近正常軟骨，基質(zhì)中未見(jiàn)明顯的膠原纖維束，呈透明軟骨樣修復(fù)。
　　空白組：1.肉眼觀：移植軟骨色澤淺黃，軟骨缺損表面僅有少許修復(fù)跡象，表面凹陷明顯，中央修復(fù)區(qū)有空洞形成，按壓感質(zhì)硬，無(wú)彈性。修復(fù)區(qū)與周圍軟骨邊界清晰，周邊軟骨退變。2.組織學(xué)改變：軟骨表層凹凸不平，軟骨細(xì)胞多為橢圓形或長(zhǎng)梭形，從表層到深

6、層軟骨細(xì)胞均未見(jiàn)軟骨陷窩，軟骨基質(zhì)染色為陰性。
　　對(duì)修復(fù)的軟骨組織進(jìn)行O`Driscoll,Keeley and Salter組織學(xué)評(píng)分，經(jīng)SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，三組間對(duì)比P<0.05，表明骨膜組、膠原膜組和空白組三種不同軟骨修復(fù)方式效果的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：骨膜組、膠原膜組和空白組三種不同軟骨修復(fù)方式效果的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，從大體標(biāo)本肉眼觀察及組織病理學(xué)切片來(lái)看，骨膜組、膠原膜組均優(yōu)于空白組，且