兔骨髓間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)后覆蓋骨膜修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損.pdf

1、目的:探討用組織工程學(xué)方法修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨損傷的有效途徑，為臨床治療關(guān)節(jié)軟骨損傷提供支持與幫助。將誘導(dǎo)后的兔BMSCs(Bone Marrow-derired Mesenchymal Stem Cells)以一定的細胞濃度移植于兔膝關(guān)節(jié)骨軟骨缺損處，用骨膜縫合固定；以單純骨膜縫合覆蓋骨軟骨缺損處作對照，研究骨膜覆蓋誘導(dǎo)后的BMSCs對關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)的療效。 方法:采集兔股骨骨髓腔骨髓液，用全骨髓培養(yǎng)法對骨髓間充質(zhì)干細胞進行貼壁培養(yǎng)

2、，使骨髓間充質(zhì)干細胞分離純化；體外培養(yǎng)擴增，繪制生長曲線，觀察細胞的生長狀態(tài)；在高密度(1×10<'6>/ml)狀態(tài)下用10ng/ml轉(zhuǎn)化生長因子β 1 (TGF-β 1)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞向軟骨方向分化，倒置顯微鏡觀察細胞分化生長情況。用免疫組織化學(xué)和原位雜交的方法檢測Ⅱ型膠原及軟骨基質(zhì)成分的表達情況。自體骨髓間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞誘導(dǎo)后移植修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損，實驗組用骨膜覆蓋固定誘導(dǎo)后的骨髓間充質(zhì)干細胞，對照組為單純骨膜覆蓋關(guān)節(jié)軟

3、骨缺損和空白對照(缺損不做任何處理)，分別于術(shù)后6周和12周取材，做大體觀察、光學(xué)顯微鏡觀察軟骨損傷修復(fù)情況并且進行組織形態(tài)學(xué)評分。評分結(jié)果進行兩因素析因設(shè)計方差分析檢驗。 結(jié)論:全骨髓培養(yǎng)法結(jié)合貼壁培養(yǎng)法是一種分離骨髓間充質(zhì)干細胞的可行方法。高密度的骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)含有TGF-β 1等成分的誘導(dǎo)培養(yǎng)液培養(yǎng)能夠向軟骨細胞方向分化。用骨膜覆蓋關(guān)節(jié)軟骨缺損能夠進行缺損修復(fù)，修復(fù)效果優(yōu)于空白對照組。骨膜覆蓋誘導(dǎo)后的骨髓間充質(zhì)干細胞修