CaCl-,2-誘導(dǎo)的大豆花粉管通道農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、為了提高大豆花粉管通道法轉(zhuǎn)基因效率，研究直接用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化方法的可行性，以秋大豆品種上海本地青為受體材料，用花粉管通道法在三種CaCl2濃度水平下進(jìn)行質(zhì)粒pCAMBIA3301 轉(zhuǎn)化，又以GV3101、LBA4404、EHA105三種農(nóng)桿菌菌株直接導(dǎo)入花粉管通道為處理進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化。以質(zhì)粒為外源基因平均結(jié)實(shí)率為36.83％，T0代種子平均成活率為60.89％，T1植株噴施除草劑后平均存活率為8.24％。以農(nóng)桿菌直接轉(zhuǎn)化平均結(jié)實(shí)率為15.9

2、2％，T0代種子平均成活率為20.40％，T1植株噴施除草劑后平均存活率為7.79％。對(duì)存活的植株提取DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)，以質(zhì)粒為外源基因的處理共獲得20株轉(zhuǎn)化苗，三種CaCl2濃度水平的轉(zhuǎn)化效率分別為0.56％、1.64％、1.40％，有兩種水平的轉(zhuǎn)化效率約為傳統(tǒng)轉(zhuǎn)化效率的三倍。以農(nóng)桿菌直接轉(zhuǎn)化的處理共獲得5株轉(zhuǎn)化苗，轉(zhuǎn)化效率分別為0.17％、0.33％、0.29％。對(duì)獲得的第T1代種子用除草劑進(jìn)行選擇處理和對(duì)轉(zhuǎn)化苗進(jìn)行PCR檢測(cè)表