花粉管通道法轉(zhuǎn)化甜瓜品種河套蜜瓜方法的比較研究.pdf

1、本研究以甜瓜品種河套蜜瓜(Cucumis melo L.cv Hetao)為實(shí)驗(yàn)材料,比較研究了花粉管通道法導(dǎo)入的線狀和環(huán)狀表達(dá)載體,以及攜帶和不攜帶核基質(zhì)附著區(qū)序列的表達(dá)載體對(duì)花粉管通道法轉(zhuǎn)化效率的影響;摸索花粉管通道法轉(zhuǎn)化河套蜜瓜的最佳導(dǎo)入時(shí)間、最佳導(dǎo)入濃度及適宜的柱頭切割方法。對(duì)轉(zhuǎn)基因后代進(jìn)行檢測(cè)時(shí),先應(yīng)用葉片涂抹法初步篩選抗生素抗性植株,再對(duì)抗性植株進(jìn)行PCR檢測(cè)。結(jié)果表明:線狀和環(huán)狀表達(dá)載體都能成功轉(zhuǎn)化得到陽(yáng)性植株,轉(zhuǎn)化率沒(méi)有

2、明顯差異;目的基因表達(dá)盒兩側(cè)攜帶核基質(zhì)附著區(qū)序列,對(duì)花粉管通道法轉(zhuǎn)化河套蜜瓜沒(méi)有促進(jìn)作用。摸索最佳導(dǎo)入時(shí)間的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在自花授粉后1～11h之內(nèi)導(dǎo)入外源DNA都能成功轉(zhuǎn)化得到陽(yáng)性植株,授粉后5h導(dǎo)入外源DNA轉(zhuǎn)化率最高,授粉24h以后導(dǎo)入均沒(méi)有檢測(cè)到陽(yáng)性植株;摸索最佳導(dǎo)入濃度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,四種濃度導(dǎo)入的轉(zhuǎn)化率沒(méi)有顯著差異;探索適宜的柱頭切割方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,切除全部柱頭導(dǎo)入的轉(zhuǎn)化率最高。
　　 通過(guò)本研究,初步明確了載體