花粉管通道法將線性化植酸酶基因?qū)胗衩鬃越幌档难芯?pdf

1、本論文的研究目的是利用基因工程手段培育具有生物安全性的轉植酸酶基因玉米，使其降解植酸、釋放無機磷，從而使轉基因玉米成為高附加值的動物飼料，提高單胃動物對磷的利用率，降低植酸磷對環(huán)境的污染。 我們構建了僅含有啟動子序列、植酸酶基因和終止子序列的線性基因轉化元件(UPN)及其兩端分別帶有T-DNA邊界序列(T-UPN)或一段載體序列(V-UPN)的不同線性轉化元件，不含選擇性標記基因和載體骨架序列，采用花粉管通道法對選定的玉米品種進

2、行轉化，共計收獲的可以檢測的種子為20400粒。 對728株T1代轉化玉米的PCR檢測結果表明，UPN、T-UPN、V-UPN三個轉化元件的陽性率分別為0.44﹪、2.2﹪和1.8﹪，平均轉化率為1.5﹪。檢測時，以種子在果穗上的不同位置分別播種、檢測，結果表明，PCR陽性株都是來源于第五圈至第九圈的種子，這個部位的陽性率達到3.57﹪，說明花粉管通道法轉化玉米的成功率與種子所處的位置有關。本實驗結果還表明，玉米授粉后20個小時

3、左右是最佳轉化時間，而轉化成功率在玉米的不同株系間沒有明顯的區(qū)別。 Southern-blot結果證明，外源植酸酶基因已經(jīng)整合到玉米基因組中。RT-PCR和植酸酶比活結果說明外源基因在植株內(nèi)實現(xiàn)了RNA水平和蛋白質(zhì)水平的表達。 上述結果表明，通過花粉管通道法進行無載體無選擇標記基因的線性化基因轉化玉米是可行的，這一技術解決了選擇標記基因和載體骨架序列帶來的安全隱患。本研究獲得的轉植酸酶基因玉米材料，為選育出高植酸酶玉米品