白藜蘆醇對復(fù)發(fā)缺血性卒中大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用研究.pdf

1、研究目的：缺血性卒中反復(fù)發(fā)作導(dǎo)致患者死亡率增加和殘疾程度加重，而在第一次短暫性腦缺血發(fā)作或小卒中發(fā)作后給予神經(jīng)保護(hù)劑可為反復(fù)卒中發(fā)作的治療提供機(jī)會。白藜蘆醇(resveratrol，RSV)對缺血性卒中是有效的神經(jīng)保護(hù)劑，但其作用機(jī)制尚不清楚。RSV與沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1(silentinformation regulatorT1，SIRT1)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated proteinkinase，AMPK)

2、代謝應(yīng)激元件有關(guān)，且參與細(xì)胞內(nèi)能量代謝反應(yīng)。本研究先制作兩次發(fā)作大腦中動脈缺血大鼠模型(Middle Cerebral Artery Occlusion，MCAO)，再通過氧-葡萄糖剝奪(oxygen-glucose deprivation，OGD)原代皮層神經(jīng)元培養(yǎng)模型，建立體外反復(fù)缺血模型，觀察RSV預(yù)處理大鼠體內(nèi)、外腦缺血模型對SIRT1蛋白表達(dá)、AMPK表達(dá)和ATP含量的影響，研究白藜蘆醇對大鼠體內(nèi)、外反復(fù)缺血模型的神經(jīng)保護(hù)作用

3、，探討其作用機(jī)制，從而為治療反復(fù)發(fā)作缺血性卒中開發(fā)新的腦保護(hù)劑治療提供幫助。
　　方法：成年18-20月齡雄性Wistar大鼠38只，采用微型動脈瘤夾夾閉法制作首次MCAO(n=14)和再次MCAO模型(n=16)，隨機(jī)分為RSV治療組(25 mg/kg/day)和實(shí)驗(yàn)對照組，術(shù)后3天測定各組大鼠腦梗死體積并評價(jià)行為缺損的變化。另外8只大鼠為假手術(shù)組，隨機(jī)分為RSV治療組(25 mg/kg/day)(n=5)和對照組(n=3)，用

4、于測定血漿、肝臟和腦組織RSV濃度。原代皮層神經(jīng)元取自18天Wistar雌性大鼠胚胎，培養(yǎng)成功后通過兩次OGD法制作體外反復(fù)缺氧模型，實(shí)驗(yàn)組OGD處理前3小時(shí)采用50μ M白藜蘆醇干預(yù)，對照組采用DMSO培養(yǎng)液處理。采用Western免疫印跡技術(shù)測定體內(nèi)、外腦缺血大鼠模型的SIRT1表達(dá)、AMPK表達(dá)，SIRT1活性和ATP水平采用試劑盒測定；采用SIRT1和AMPK特異抑制劑證實(shí)RSV對OGD神經(jīng)元的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　結(jié)果：1

5、.與對照組比較，RSV顯著降低首次MCAO大鼠腦梗死體積和改善神經(jīng)行為損害(P<0.01，P<0.01)，尤其是顯著降低再次MCAO大鼠腦梗死體積和改善神經(jīng)行為損害(P<0.001，P<0.01)；RSV顯著降低首次和再次OGD誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)皮層神經(jīng)元死亡率(P<0.001)。2.與對照組比較，RSV顯著升高缺血腦組織和OGD處理培養(yǎng)皮層神經(jīng)元的SIRT1活性(P=0.0014和P=0.002)；但3天RSV治療未顯著增加缺血大鼠腦組織

6、的SIRT1表達(dá)水平(P>0.05)。而3小時(shí)RSV預(yù)處理能夠增加OGD處理培養(yǎng)皮層神經(jīng)元SIRT1表達(dá)水平(P<0.05)。3.與對照組比較，RSV均能顯著升高缺血腦組織和OGD處理培養(yǎng)神經(jīng)元的AMPK活性(P<0.01)。4.與對照組比較，白藜蘆醇喂養(yǎng)3天后假手術(shù)組、首次MCAO組和再次MCAO組大鼠缺血腦組織ATP含量顯著增高(P<0.001)，白藜蘆醇使組織內(nèi)ATP含量升高1.5-2倍；白藜蘆醇干預(yù)培養(yǎng)皮層神經(jīng)元3小時(shí)后正常對照