乏氧誘導(dǎo)因子1α在骨肉瘤中的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：探討乏氧誘導(dǎo)因子-1a(HIF-1a)在骨肉瘤組織中的表達(dá)及臨床意義。并檢測(cè)體外乏氧條件下骨肉瘤SaOS-2細(xì)胞中乏氧誘導(dǎo)因子-1a(HIF-1a)的表達(dá)情況，探討乏氧激活HIF-1a的分子機(jī)制。 方法：(1)采用免疫組織化學(xué)方法(SP法)，檢測(cè)了25例骨肉瘤和10例正常骨組織中HIF-1a的表達(dá)，并對(duì)有關(guān)臨床和病理指標(biāo)綜合分析。(2)通過(guò)體外培養(yǎng)骨肉瘤SaOS-2細(xì)胞達(dá)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，在1﹪的氧濃度下分別培養(yǎng)8、12、24

2、小時(shí)，成功建立骨肉瘤細(xì)胞體外乏氧培養(yǎng)模型。(3)觀察乏氧培養(yǎng)不同時(shí)相(8 h，12h，24h)HIF-1a的表達(dá)并用免疫組化(SP法)及Rt-PER的方法檢測(cè)HIF-1a。用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)骨肉瘤細(xì)胞在常氧及乏氧不同時(shí)相HIF-1a的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)分析。 結(jié)果：(1)HIF-1a在骨肉瘤中表達(dá)陽(yáng)性率為56﹪，而正常骨組織中均為陰性表達(dá)：HIF-1a的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤的體積大小、Dahlin分型無(wú)關(guān)(P>0.05)，而與骨肉瘤臨床

3、分期和軟組織浸潤(rùn)密切相關(guān)(P<0.05)。(2)乏氧處理一定時(shí)間后(8、12、24小時(shí))，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Rt-PCR)檢測(cè)HIF-1a mRNA的轉(zhuǎn)錄結(jié)果顯示，SaOS-2細(xì)胞系中HIF-1a mRNA常氧條件下就存在較高轉(zhuǎn)錄，隨著乏氧時(shí)間延長(zhǎng)，mRNA的轉(zhuǎn)錄沒(méi)有明顯改變。(3)通過(guò)免疫組化SP法半定量檢測(cè)HIF-1a蛋白表達(dá)結(jié)果，SaOS-2細(xì)胞系在常氧條件下HIF-1a蛋白沒(méi)有表達(dá)或僅有少量表達(dá)，乏氧處理后，HIF-1a蛋白

4、表達(dá)顯著提高，與乏氧時(shí)間呈現(xiàn)直線相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=0.944)。乏氧作用24小時(shí)后，可見(jiàn)強(qiáng)表達(dá)的HIF-1a蛋白棕黃色顆粒，主要定位于細(xì)胞核。并且隨著乏氧時(shí)間延長(zhǎng)，染色強(qiáng)度由中度陽(yáng)性(++)，增強(qiáng)至強(qiáng)度陽(yáng)性(+++)，統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著意義(p<0.05)。 結(jié)論：HIF-1a的高表達(dá)參與了骨肉瘤的惡性進(jìn)展，可作為新的分子靶點(diǎn)應(yīng)用于骨肉瘤診斷、基因治療和預(yù)后判斷。且在骨肉瘤SaOS-2細(xì)胞系中，乏氧對(duì)HIF-1 a信使RNA水平的影響